论文部分内容阅读
本研究利用cDNA-AFLP改良法分离了13个草菇菌丝低温诱导表达基因v1,v2,v3,v4,v5,v6,v7,v8,v9,v10,v11,v12,v13。DNA序列测定结果表明,V1为488bp,V2为551bp,V3为557bp,V4为285bp,V5为173bp,V6为604bp,V7为743bp,V8为836bp,V9为709bp,V10大约为720bp(未测完),V11和V12是同一基因片段为1077bp,V13为617bp。BLASTn搜索结果表明V1,V2,V3,V4,V5,V6,V7,V9,V10,V11,V12,V13为未知新基因,V8与ATP酶同源率较高,在一段长312bp的区域,与ATP酶的同源率达84-93%。BLASTx搜索结果表明:V1,V2,V3,V4,V6,V8,V11(V12),V13的mRNA翻译产物能够找到同源率较高的蛋白,其中六个基因片段,V1,V2,V3,V4,V8,V11的mRNA翻译产物与其他真菌蛋白的同源率较高。V3的mRNA翻译产物与灰盖鬼伞细胞色素P450的同源率为33%,V8的mRNA翻译产物与粗糙脉胞菌的ca2+-ATP酶同源性为68%。 本研究以草菇基因组DNA为模板,设计了一对引物(rasR1,rasF1),利用PCR技术克隆了草菇的一段启动子片段r5a。DNA序列测定结果及DNA序列对比结果显示:该启动子序列(r5a)与已知的食用菌ras启动子同源率低,采用Plant Prediction和Plant Care软件对克隆的草菇启动子片段进行分析,结果表明该启动子序列的243-293bp及539-589bp区域为预测的基础启动子区,有两个转录起始位点(283bp及579bp处),有多种重要的顺式作用元件,如TATA-box,CAAT-box,G-box,ABRE元件,WUN-motif,HSE元件,P-box,TATC-Vbox,I-box等。