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背景与目的：人端粒酶逆转录酶(human telomerase reversetranscrip tase, hTERT)是端粒酶复合物的核心成分,其表达状态是细胞调控端粒酶活性的重要环节。hTERT是最早发现,也是目前研究较多的广谱肿瘤相关抗原(TAA)之一。已经证实在85%以上的人类恶性肿瘤细胞中均存在hTERT的再激活,并且在肿瘤的发生发展过程中发挥关键作用。hTERT的广泛表达使其成为肿瘤治疗的理想靶点。本研究通过特异性扩增hTERT基因,成功构建了hTERT新型基因疫苗,并且建立了稳定表达hTERT的B16细胞系。为进一步研究hTERT基因疫苗在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了研究基础。方法：通过RT-PCR的方法从人前列腺癌细胞系PC-3M中特异性扩增hTERT基因,连接到真核表达载体pIRES-neo中,构建真核表达质粒pIRES-neo-hTERT。脂质体法瞬时转染B16细胞,通过G418加压筛选单克隆细胞系,用western blot及免疫荧光和流式细胞术分别检测B16细胞中hTERT基因的蛋白表达。扩增出hTERT基因片段eTERT (1609bp-2628bp),连接到真核表达载体pVAX1-IRES中,构建hTERT广谱抗肿瘤基因疫苗pVAX1-eTERTFcGB,脂质体法瞬时转染293T细胞,通过免疫荧光和流式细胞术检测其表达情况。结果：特异性扩增得到大小与人hTERT基因相符的基因片段,序列测定证实与GenBank上登录的序列一致；成功构建真核表达质粒pIRES-neo-hTERT。质粒成功转染B16细胞,经加压筛选,得到稳定表达hTERT的B16细胞系。成功扩增出hTERT基因片段eTERT (1609bp-2628bp),并构建hTERT广谱抗肿瘤基因疫苗pVAX1-eTERTFcGB,流式细胞仪和免疫荧光的检测结果显示,重组基因疫苗质粒pVAX1-eTERTFcGB在293T细胞中得到很好的表达。结论：特异性扩增出hTERT基因,成功构建真核表达载体并筛选出稳定表达hTERT的B16细胞系；成功构建hTERT广谱抗肿瘤基因疫苗pVAXl-eTERTFcGB,为进一步研究hTERT基因疫苗的体内外免疫功能奠定了基础。