水牛CD14的克隆与表达

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目的:本研究旨在克隆、表达水牛CD14基因,并对其蛋白进行纯化及Western Blot鉴定。方法:采用RT-PCR方法从水牛外周血白细胞中扩增得到水牛白细胞分化抗原14(Buffalo cluster of differentiation antigen14, bCD14)基因CDS区,构建pET28a—bCD14重组质粒,转化入大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE,纯化得到目的蛋白后,进行Western blot分析。结果:克隆获得的bCD14基因包括一个含1122个bp的开放阅读框,编码373个氨基酸,IPTG诱导表达得到了携带组氨酸标签的bCD14融合蛋白。可溶性分析发现,融合蛋白主要以包涵体形式存在,用抗His单克隆抗体进行Western Blot检测,得到了一条约46KD的特异性抗体结合带,表明bCD14原核表达载体构建成功并表达。结论:本研究克隆、表达了bCD14,为进一步揭示水牛革兰氏阴性菌的感染机制奠定了坚实的基础。
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