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心力衰竭是一种严重威胁人类健康的疾病,除了心脏自身功能及构造的损伤,还合并全身其他脏器的功能损害,尤其是肾脏。因心脏与肾脏共同参与调节体液循环及血流动力学,故能够彼此相互影响。雷米普利(Ramipril,RAM)是临床常用的ACEI类扩血管药物,曲美他嗪(Trimetazidine,TMZ)是通过影响心肌能量代谢而改善心肌缺血的药物。RAM与TMZ两种药物在肾脏保护方面仍在进一步研究。该实验通过检测各组大鼠肾脏细胞中细胞色素C(CytochromeC,Cyt-C)、Bcl-2和Bax的表达水平,并分析雷米普利与曲美他嗪单独以及联合应用可能对慢性心力衰竭大鼠肾脏细胞凋亡所产生的影响。目的:实验心衰大鼠模型经肾上腹主动脉缩窄术实施。确认心衰模型成功后进行药物干预,经过苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察大鼠肾脏组织的病理改变,原位末端转移酶标记法(TUNE法)检测肾脏细胞凋亡趋势,免疫组织化学法(SP)和Western法对Cytochrome C蛋白、Bcl-2和Bax蛋白在慢性心力衰竭大鼠肾脏组织中的表达进行检测,RT-PCR法检测Cytochrome C、Bcl-2和Bax三者的mRNA表达水平,探究雷米普利和曲美他嗪单独应用以及联合应用对慢性心衰大鼠肾脏细胞凋亡发生的影响。方法:1雄性洁净级Wistar大鼠50只,在50只大鼠中随机选取10只大鼠作为空白对照组,其余实验大鼠进行腹主动脉缩窄手术。左室舒张末压(LVEDP)大于等于15mmHg被设为成功造模标准。同时对空白对照组大鼠只进行剥离出腹主动脉而不结扎。完成造模后将大鼠随机分为模型组、雷米普利组、曲美他嗪组和联合用药组。2各组大鼠分别达到观察终点时,各个大鼠的LVEDP使用多导电生理记录仪测量并详细准确地记录结果。开腹取各大鼠肾脏,称重。3采用he染色观察各个实验对象的肾脏组织病理学改变。4运用tunel法检测肾脏细胞凋亡情况并计算细胞凋亡指数(ai)。5sp法、western法检测大鼠肾脏组织cyt-c、bcl-2和bax三者的蛋白表达情况。6经rt-pcr法测定各组大鼠cyt-c、bcl-2和bax三者的mrna表达水平。结果:1lvedp结果:空白对照组、模型组、雷米普利组、曲美他嗪组和联合用药组大鼠的lvedp分别为:(5.63±0.98)mmhg、(19.62±1.91)mmhg、(12.24±1.43)mmhg、(12.03±1.23)mmhg、(7.48±1.41)mmhg。模型组及用药组大鼠的lvedp与对照组相比较均有所上升(p<0.01)。和模型组比较,用药组大鼠的lvedp明显下降(p<0.01),联合用药组下降最明显(p<0.01),雷米普利组和曲美他嗪组比较无统计学差异(p>0.05)。2he染色观察实验对象肾脏组织的病理形态学改变:空白对照组大鼠肾小球及肾小管细胞形态正常,排列规整、紧密,结构清晰;模型组大鼠肾脏细胞肿胀、脱落,排列疏松,结构紊乱;用药组较模型组均有改善,且联合用药组改善最显著。3tunel法检测各实验组大鼠的肾脏细胞凋亡指数(ai)结果显示:空白对照组、模型组、雷米普利组、曲美他嗪组和联合用药组大鼠的ai结果分别是(2.62±0.84)%,(40.82±1.31)%,(20.02±1.14)%,(20.10±1.20)%,(14.27±1.40)%。模型组及用药组大鼠与空白对照组大鼠的ai比较均明显增高(p<0.01),与模型组比较,用药组ai均明显降低(p<0.01),且联合用药组降低最明显(p<0.01)。4用sp法检测各组实验大鼠肾脏组织中bcl-2和bax蛋白的表达水平:bcl-2蛋白在各组大鼠肾小管细胞中的表达趋势为:对照组强阳性:细胞内在镜下显示含有较多棕黄色物质,模型组无明显阳性反应,用药组均可见阳性反应,但阳性强度弱于对照组,联合用药组较单用药组阳性反应较强。bax蛋白表达结果显示:对照组大鼠肾小管细胞内无明显棕黄色颗粒;模型组大鼠细胞内则有明显棕黄色颗粒沉积,用药组阳性反应弱,联合用药组最弱。5 Western法检测各组大鼠肾组织Cyt-C蛋白表达情况:空白对照组、模型组、雷米普利组、曲美他嗪组和联合用药组大鼠的Cyt-C表达结果是0.32±0.12,2.53±0.10,1.50±0.11,1.58±0.12,0.75±0.06,后四组与空白对照组大鼠比较Cyt-C蛋白表达水平均明显增高(P<0.01),与模型组比较,用药组其均明显降低(P<0.01),且联合用药组降低最明显(P<0.01)。6 RT-PCR法检测各组大鼠中Cyt-C、Bcl-2和Bax的mRNA在肾脏细胞内的表达水平:Cyt-C、Bax mRNA在细胞内的表达趋势相似,与空白对照组相比,二者在模型组大鼠中的表达水平均为升高趋势(P<0.01),用药组中二者的m RNA水平较模型组明显降低(P<0.01),联合用药效果最佳,但二者的表达水平仍高于空白对照组。与空白对照组比较,其余四组中Bcl-2mRNA水平则明显的下降(P<0.01),其中模型组Bcl-2 m RNA的表达水平最低(P<0.01),用药组中联合用药组的Bcl-2 m RNA表达水平最高。三者在雷米普利组与曲美他嗪组中的mRNA表达水平无统计学差异(P>0.05)。结论:1慢性心力衰竭大鼠肾功能损害与细胞凋亡的发生密切相关。2雷米普利与曲美他嗪可能通过抑制细胞凋亡发生而保护心衰大鼠的肾功能,且两者同时使用的效果优于分别用药的效果,故两者拥有协同作用,为治疗慢性心衰合并的肾功能损害提出了新的治疗方案。