志贺氏菌51种血清型分子鉴定系统的研发及应用

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血清型作为大多数病原菌的一种生物学表型,在病原菌的鉴定、传染病的调查和溯源等方面具有重要意义。志贺氏菌(Shigella)是引起五岁以下儿童中至重度腹泻的主要病原体。目前,志贺氏菌血清型的鉴定主要采用传统的玻片凝集试验,但该方法费时耗力。文献已报道的基于PCR的分子鉴定方法不能覆盖全部志贺氏菌的血清型。因此建立高效、快速、高通量的新型志贺氏菌血清型分子鉴定方法具有重要意义。具体研究成果如下:第一章,主要阐述志贺氏菌病原学特征、生化特性、流行情况及疫苗现状。由于志贺氏菌血清型与大肠杆菌的血清型存在交叉反应,为了防止体系的误判,查阅文献,寻找区分志贺氏菌和肠侵袭性大肠杆菌(enteroinvasive Escherichia coli,EIEC)的方法。对比了几种常见的志贺氏菌血清型分子鉴定方法,提出了本论文的研究方法和研究内容。第二章,根据EIEC的6个特异位点建立了基于熔解阵列技术的志贺氏菌和EIEC区分体系,可在2.5小时内单管同时检测EIEC的6个位点和一个内控基因。该体系的最低检出限为10 copies/pL。其特异性和稳定性考察结果显示:各个对象之间无交叉反应,特异性良好,批内差和批间差的变异系数均小于0.35%。对278份标本的评估实验结果显示,本研究建立的方法,灵敏度为99.6%,特异性为100%,与生化鉴定方法总体一致率为99.6%,Kappa值为0.92。该体系有助于志贺氏菌和EIEC的鉴别与分离,具有良好的应用前景。第三章,根据福氏志贺菌的O-抗原合成及修饰基因、宋内志贺菌O-抗原合成基因和种属特异基因、痢疾志贺菌和鲍氏志贺菌的O-抗原合成基因的基因序列,建立了基于熔解阵列技术的51种志贺氏菌血清型分子鉴定系统。该方法可在2.5小时内鉴定志贺氏菌的51种血清型,最低检出限为1000 copies/μL,批内差和批间差的变异系数均小于0.40%。使用258份标本对体系进行临床评估,结果显示本研究建立的方法与玻片凝集试验总体一致率为97.6%。该体系为志贺氏菌血清型的鉴定提供一种快速、准确、简便和高通量的新型方法,对该致病菌的监测、预防、控制具有重要意义。第四章,对本论文进行了总结与展望。
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