论文部分内容阅读
本研究以乌龙茶代表性品种“铁观音”茶树的未成熟胚为材料,进行如下研究:①建立体胚增殖、成熟与萌发的循环系统;②采用HPLC研究茶树体胚发生过程中内源激素含量变化;③检测与茶树体胚发生密切相关的APX活性;④进行apx基因同源克隆并利用荧光定量PCR技术分析茶树体胚发生过程apx基因转录水平表达变化。主要研究结果如下:
1.循环的茶树体胚增殖系统、体胚成熟与植株再生体系的建立
在附加2 mg·L-1BA和0.2 mg·L-1 IBA配合甜菜碱800 mg·L-1的改良MS培养基上诱导直接体胚发生,增殖系统的维持途径的培养基为:改良MS+3 mg·L-1肉桂酸+20 g·L-1蔗糖+10 g·L-1山梨醇。当3%蔗糖与2%山梨醇配合使用时,产生大子叶胚的百分率明显提高。将产生的大子叶胚分离转移到含有5%蔗糖与5%PEG的无激素MS培养基中,经过40 d左右的体胚能正常成熟。成熟体胚在附加2 mg·L-1 BA与0.1 mg·L-1 IBA的MS培养基上可以萌发成苗。
2.茶树体胚发生过程中内源激素含量变化的HPLC分析
采用HPLC方法测定了茶树体胚发生过程中内源激素含量变化。在体胚发生过程中,球形胚时期ZT高于子叶胚时期,到胚胎发育后期的成熟胚与萌发阶段呈明显上升趋势。ABA由球形胚到子叶胚阶段ABA含量下降,到成熟胚阶段时,出现一个明显的峰值。GA3在球形胚阶段达含量较低,子叶形胚时降到最低值,到胚胎发育后期呈明显上升趋势,到萌发阶段GA3含量达到最大。球形胚中的IAA含量显著高于其它阶段,以后呈明显下降趋势。ABA与IAA的比值先增大,然后下降。ABA/GA3的比值先维持在较高水平,到成熟萌发阶段下降。球形胚的IAA/ZT高于其它各个时期。
3.茶树体胚发生过程中APX活性变化
茶树体胚的各个阶段都检测到了APX的活性,并且在球形胚时的酶活性最高,到了心形胚、子叶胚、成熟胚酶活性下降后维持在一稳定水平,萌发胚酶活性略有升高。
4.茶树体胚apx基因的克隆
本实验结果表明茶树体胚apx基因开放阅读框为753 bp,含有一个起始密码子ATG和终止密码子TAA,编码250个氨基酸。推导的氨基酸序列与已登录的其它植物apx基因具有很高的同源性。
5.茶树体胚发生过程apx基因转录水平表达变化的荧光定量PCR分析
在茶树体胚发生过程中,随着体细胞胚的发育,从球形胚、心形胚到子叶形胚中的apx基因表达量有增加趋势,成熟胚阶段下降,到萌发胚阶段表达量最大。推测apx基因在茶树体胚发生过程中起重要作用。