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结肠癌是我国高发的恶性肿瘤,占消化道恶性肿瘤的第三位,其发病率逐年上升,且逐步趋向低龄化。目前结肠癌诊断主要依赖肠镜、穿刺细胞学诊断及腹部CT等手段,大多数患者明确诊断时已处于癌症进展期甚至晚期,部分患者失去了手术治疗的机会,因此寻找特异的早期诊断标记十分重要。鱼精蛋白(protamines, PRM)被认为与男性不育有关,是精子细胞核内与DNA结合的主要蛋白。最新研究表明,PRM1可能是一个新的结肠癌相关的肿瘤/睾丸(Cancer/Testis,CT)抗原基因。本研究通过检测结肠腺癌组织中PRMl-mRNA和蛋白的表达,阐述PRM1在结肠癌组织中的意义。1实验路线1.1收集结肠癌组织、正常结肠组织；收集结肠癌患者外周血清。1.2实时荧光定量PCR比较结肠癌组织与正常结肠组织PRM1mRNA表达水平差异。1.3琼脂糖凝胶电泳比较结肠癌组织与正常肠组织PRM1-mRNA含量差异。1.4PRM1mRNA检测用于结肠癌诊断敏感性分析。1.5免疫组织化学染色观察PRM1在结肠癌组织中的表达及组织分布。1.5.1结肠癌组织PRM1表达水平与正常结肠组织PRM1表达水平差异比较。1.5.2不同分化程度结肠癌组织PRM1表达水平差异比较。1.6ELISA试验检测结肠癌患者血清PRM1水平。1.6.1结肠癌患者血清PRM1水平与健康人差异比较。1.6.2不同分化程度结肠腺癌患者血清PRM1水平差异比较。1.6.3不同分期结肠癌患者血清PRM1水平差异比较。1.6.4PRM1血清检测用于结肠癌诊断的阳性率。2结果2.1结肠癌PRM1mRNA表达水平高于正常结肠组织53例结肠癌组织平均PRM1-mRNA含量显著高于正常结肠组织,P=0.01116。将荧光定量PCR反应产物进行琼脂糖凝胶电泳分析,通过辉度扫描比较结肠癌与正常结肠组织PRM1mRNA含量差异,结果与定量PCR结果一致。2.2组织PRM1mRNA检测用于结肠癌诊断敏感性分析以结肠癌组织中PRMl-mRNA含量大于等于正常结肠组织PRM1-mRNA含量的2倍以上记为PRM1-mRNA表达阳性。统计结果显示,53例结肠癌病例PRM1mRNA检测总体阳性率为96.23%(52/53)。2.3免疫组织化学染色观察PRM1在结肠癌组织中的表达实验采取免疫组织化学染色的方法检测结肠癌组织表达PRM1表达及确定组织分布特点。结果显示,结肠癌细胞胞浆内及癌细胞围成的腺腔内可见PRM1阳性染色颗粒,正常结肠组织细胞内无明显PRM1阳性染色。低分化腺癌细胞内PRM1染色强度明显高于高分化腺癌细胞。2.4ELISA试验检测结肠癌患者血清PRM1水平2.4.1结肠癌患者血清PRM1水平与健康人差异比较ELISA试验检测结肠癌患者与健康成年人血清PRM1水平,结果显示,结肠癌患者血清PRM1水平显著高于健康成年人,P<0.05。2.4.2不同分化程度结肠腺癌患者血清PRM1水平差异比较按结肠腺癌细胞病理分化程度比较患者血清PRM1水平差异,结果显示,低分化结肠癌患者血清PRM1水平高于高分化结肠癌患者,差异具有显著性,P<0.05。中、低分化,中、高分化两组结肠癌患者血清PRM1水平无显著差异。2.4.3不同分期结肠癌患者血清PRM1水平差异比较比较T1NXMX、T2NXMX、T3NXMX结肠癌患者血清PRM1水平,结果显示,各组患者血清PRM1水平无明显差异,说明结肠癌患者血清PRM1水平升高程度与肿瘤分期无关。2.4.4PRM1血清检测用于结肠癌诊断的阳性率根据健康成年人PRM1血清水平的95%可信区间判断结肠癌患者血清水平阳性率,结果显示,结肠癌患者血清PRM1检测阳性率为80%(24/30)。3结论3.1荧光实时定量PCR结果显示,结肠腺癌组织中PRM1mRNA水平较正常结肠组织显著升高。3.2免疫组织化学染色显示PRM1蛋白阳性表达可见于结肠癌细胞及其围成的腺腔内,PRM1表达水平与结肠癌细胞分化程度有关：低分化腺癌PRM1表达水平高于中分化腺癌,高分化腺癌及正常结肠组织未见PRM1阳性表达。提示PRM1可能通过旁分泌的方式作用于肿瘤细胞。3.3结肠癌患者外周血清PRM1水平高于健康对照组,提示PRM1可能分泌入血,通过内分泌的方式作用于其他器官。3.4健康对照组血清PRM1水平的95%可信区间判断外周血PRM1水平用于结肠癌诊断的阳性率为80%。