水稻(Oryza sativa L.)苗期冷害是导致水稻减产的重要因素之一。为了发掘新的耐冷基因、诠释其耐冷分子机制并应用分子育种的手段提高水稻苗期耐冷性,前期从已构建的水稻苗期低温诱导表达正向抑制差减cDNA文库中,发现了一个受低温诱导上调表达的功能未知的C2H2型锌指结构域蛋白新基因(OsCOI)。本研究通过PCR的方法从水稻中克隆了该基因,构建其植物过表达和RNA干扰(RNAi)表达载体,并通过农杆菌介导转入水稻基因组中,获得了相应的转基因水稻株系。为进一步研究OsCOI的功能,探讨其在水稻耐冷性分子机制和分子育种中的应用价值奠定了基础。取得的主要研究结果有:1.通过PCR技术克隆了OsCOI基因的cDNA,序列分析表明该cDNA片段全长为1235 bp,开放阅读框810 bp,编码269个氨基酸。核苷酸序列同源性分析表明,该基因与GenBank中已登记的AK072942的同源性高达100%。生物信息学分析表明,该基因编码一个含有两个C2H2锌指结构域的锌指蛋白。2.分别构建了OsCOI基因的过表达载体pAHLG-OsCOI和RNAi表达载体p1300-OsCOIRNi1/2。采用电激法将两种表达载体导入根癌农杆菌中,并利用设计的两对特异性引物进行农杆菌菌落PCR检测,证明两种质粒均已导入农杆菌中。3.通过农杆菌介导的遗传转化方法,用上述两种表达载体将OsCOI基因导入粳稻品种日本晴中。在含有潮霉素的培养基上筛选获得了3株过表达植株和12株RNAi表达植株。进一步利用PCR方法检测转基因植株,初步证明目的基因已经整合到T0代植株中。