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目的：观察血管内皮生长因子(VEGF)/色素上皮衍生因子(PEDF)在博来霉素(Neomycin,BLM)诱导的小鼠肺纤维化过程中各时期的表达变化,以及柴胡皂甙d(saikosaponin-dSSd)干预后,对博来霉素致肺纤维化小鼠肺组织血管VEGF/PEDF在不同时期表达变化的调节作用,并探讨其与抗肺纤维化作用的关系。
方法：将80只小鼠随机分为4组(各组n=20),其中3组为BLM诱导肺纤维化模型组(气管内注射BLM5mg/kg),分别为单纯模型组(BLM组),SSd大、小剂量组,造模后1h,后两组分别腹腔内注入SSd2.0mg/kg(0.2mL),1.0mg/kg(0.2mL),每天一次,连续28天,BLM每天注入同体积的生理盐水,另一组为正常对照组(Cont组),分别于3,7,14,28天各组随机处死5只小鼠,取肺组织MASSON染色观察纤维化程度,样本碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量,免疫荧光观察PEDF、VEGF蛋白在肺内表达的规律,RT-PCR观察各时间点REDF,VEGFmRNA表达的强度。
结果：(1)MASSON染色模型组、SSd组均呈纤维化逐渐进展的动态变化,第28天时,纤维化程度评分SSd大、小剂量组纤维化程度均较BLM组轻(P＜0.01),SSd组之间比较无明显差异;
(2)HYP含量测定模型组、SSd组HYP含量随时间逐渐增加,到28天达高峰,7、14及28d时SSd大、小剂量组HYP含量也少于BLM组(P＜0.01),第14天及28天,大剂量SSd组HYP含量少于小剂量组(P＜0.05);
(3)免疫荧光结果模型组、SSd组VEGF在时间上,在纤维化早期(3,7天)分布较多,空间上,在肺纤维化程度较轻的区域分布较多,在纤维化中后期(14,28天)以及肺纤维程度高的区域分布较少,PEDF的分布随着时间推进逐渐增多,尤其在肺纤维化程度高的区域分布密集;
(4)VEGF/PEDFmRNAPCR结果各模型组、SSd组VEGFmRNA从第三天开始升高,第7天达高峰,之后逐渐下降,28天到最低,SSd大、小剂量组各时点较BLM组VEGFmRNA水平降低,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),SSd大、小剂量组第7、14天,差异有统计学意义(P＜0.05)。PEDFmRNA第3,7天表达仍较低,14天开始表达明显增高,28天达高峰,总体呈现逐渐增高趋势;SSD治疗后,SSd大、小剂量组各时点较BLM组PEDFmRNA表达水平升高,其中第7、14及28天差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),SSd大、小剂量组于第7、14天差异有统计学意义(P＜0.05);
结论：小鼠肺组织的病理特点及纤维化程度评分说明气管内注射博来霉素建立小鼠肺纤维化模型成功,并可用于肺间质纤维化研究。在肺纤维化过程中,VEGF/PEDF比例平衡早期先增大,后期减小的动态变化,可能在肺纤维化形成过程中起着重要作用;SSd干预后,纤维化程度及HYP含量明显降低,表明SSd能够明显抑制小鼠肺纤维化进展,机制可能与下调VEGF的表达,上调PEDF的表达有关。