牡竹属竹叶化学成分研究

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植物资源的化学利用是当前的研究热点。竹子是森林资源的重要组成部分,在我国分布广泛。竹子具有丰富的次生代谢产物,对竹类资源化学成分的研究和开发利用具有重要意义。牡竹属是我国重要的丛生竹属,为了全面研究牡竹属竹叶化学成分,揭示竹叶化学成分的生物活性,本文以牡竹属中具有药用价值的麻竹为研究对象,对其竹叶的化学成分进行分离、纯化和结构鉴定;建立了竹叶中香豆素类化合物高效液相色谱检测法;并对牡竹属10种竹叶的化学成分进行了比较研究,探讨同属的竹类植物化学成分的差异,为更好的利用牡竹属竹叶资源提供理论依据。主要研究结果如下:(1)采集麻竹竹叶,用95%乙醇浸提,石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取。乙酸乙酯相经硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、高压制备色谱及重结晶,得到17种单体化合物。通过理化性质、波谱数据分析、高效液相色谱法等方法,分别鉴定为牡荆苷、异牡荆苷、木犀草素、苜蓿素、7-甲氧基-苜蓿素、苜蓿素-4’-O-葡萄糖苷、苜蓿素-7-O-葡萄糖苷、芹菜素、芹菜素-7-O-葡萄糖苷、芹菜素-6-C-阿拉伯糖苷、芹菜素-7-O-葡萄糖-6’’-O-鼠李糖苷、对羟基苯甲醛、5-羟基-2-甲氧基-苯甲醛、黑麦草内酯、去氢催吐萝芙木醇、催吐萝芙木醇-9-O-葡萄糖苷和4,4’,9,9’-四羟基-3,3’,5,5’-四甲氧基-7,7’-单环氧木脂素,其中有11个黄酮、2个酚酸、3个萜类及1个木脂素类化合物。除牡荆苷外,其它16种化合物均首次在麻竹中分离得到。对获得的质量相对较大化合物15即4,4’,9,9’-四羟基-3,3’,5,5’-四甲氧基-7,7’-单环氧木脂素进行了体外抗肿瘤细胞活性测定,结果表明其对HeLa细胞增殖没有抑制作用。(2)建立了一种简便、快速、准确的同时测定13种黄酮类化合物含量的高效液相色谱法。结果表明,异荭草苷、荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷、木犀草素、芹菜素-7-O-葡萄糖-6’’-O-鼠李糖苷、芹菜素-7-O-葡萄糖苷、苜蓿素-7-O-葡萄糖苷、6-反式-(2’’-O-α-鼠李糖基)乙烯基-5,7,3’,4’-四羟基黄酮、芹菜素、苜蓿素、Demethyltorosaflavone和7-甲氧基-苜蓿素在各自的线性范围内呈良好的线性关系,各标准品的LOD值在0.01~0.03mg/kg之间,LOQ值在0.02~0.34mg/kg之间。本试验仪器的精密度良好,且13种标准品较稳定。采用建立的方法对牡竹属10种竹种包括麻竹、龙竹、牡竹、黄竹、梁山慈竹、花吊丝竹、云南龙竹、福贡龙竹、勃氏甜龙竹和版纳甜龙竹竹叶黄酮含量进行分析,结果显示各竹种竹叶黄酮类化合物含量存在差异。异荭草苷、荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷和芹菜素-7-O-葡萄糖-6’-O-鼠李糖苷在10种竹叶中含量普遍较高,其次是芹菜素-7-O-葡萄糖苷和苜蓿素-7-O-葡萄糖苷,木犀草素、6-反式-(2’-O-α-鼠李糖基)乙烯基-5,7,3’,4’-四羟基黄酮、芹菜素、苜蓿素、Demethyltorosaflavone和7-甲氧基-苜蓿素含量较小。(3)以70%乙醇为提取溶剂,超声波提取,高效液相色谱检测,首次建立了竹叶中12种香豆素类化合物同时检测方法。竹叶样品经70%乙醇超声提取3次,每次30min;Florisil SPE柱净化,5mL甲醇洗脱。结果表明,茵芋苷、东莨菪苷、东莨菪内酯、伞形酮、6,7-二甲氧基香豆素、香豆素、补骨脂素、花椒毒素、5,7-二甲氧基香豆素、茴芹内酯、欧前胡素和蛇床子素等12种香豆素的LOD值在0.19~0.85mg/kg之间,LOQ值在0.64~2.82mg/kg之间。在5~45mg/kg的添加浓度内,添加回收率在47.41~112.25%之间,RSD≤19.69%。采用建立的方法分析了牡竹属10种竹叶中香豆素类化合物含量,共检测到东莨菪苷、东莨菪内酯、伞形酮、香豆素和茴芹内酯5种香豆素,其中,东莨菪内酯为其共有成分,含量在5.26~37.84mg/kg之间。10种竹叶香豆素总含量在20.39~152.96mg/kg之间,福贡龙竹竹叶中的香豆素类化合物总含量最高,梁山慈竹竹叶中所含香豆素总含量最低。(4)对牡竹属10种竹种竹叶挥发油化学成分进行分析比较,发现10种竹叶挥发油中醛类、酮类和醇类化合物在各竹叶挥发油中相对含量较高,其次是烷烯烃类、酚类和酯类化合物,醚类、酸类、萘类、呋喃类及其它类化合物在各竹叶挥发油中相对含量较低。10种竹叶挥发油化学成分中含有18种共有成分,其中,反式-2-己烯醛是各竹种挥发油中的重要成分。(5)对牡竹属10种竹种竹叶中的蛋白质、多糖、叶绿素及矿质元素等化学成分含量进行比较研究,结果表明,蛋白质含量在12.90~22.12%之间,梁山慈竹含量最高,麻竹含量最低,黄竹和云南龙竹、花吊丝竹和版纳甜龙竹之间蛋白质含量不存在显著性差异,其它几种竹种蛋白质含量存在显著性差异。10种竹叶多糖含量在0.38~0.82mg/g之间,含量最高的竹种为龙竹,含量最低的为牡竹。10种竹叶叶绿素a的含量在1.69~3.82mg/g之间,叶绿素b的含量在0.79~1.60mg/g之间,叶绿素总含量在2.48~5.37mg/g之间,其中勃氏甜龙竹竹叶叶绿素a、叶绿素b和叶绿素总含量均较大。10种竹叶中含有丰富的矿质元素,其中K、Ca、Mg元素含量较高,其次是Mn、Fe、Al、Na、Zn元素,Co、As、Se、Mo、Hg和Pb在竹叶中含量很低。本文研究结果为麻竹药理活性研究奠定基础,为竹叶香豆素类化学成分的药用、食用等的开发利用提供科学依据,对牡竹属竹叶资源的化学利用具有重要的理论指导意义。
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