RNAi-VEGF对胆管癌治疗的体内实验研究

来源 :内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:clgg1976
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目的:(1)通过构建胆管癌裸鼠瘤模型后利用携带有质粒pGCsiRNA-VEGF的减毒沙门菌对裸鼠瘤的靶向治疗的研究。  (2)探究pGCsiRNA-VEGF是否能影响到胆管癌的发生、发展及可能存在的机制为胆管癌基治疗开辟新的途径。  方法:通过尾静脉注射QBC939细胞成功构建胆管癌裸鼠瘤模型,在利用减毒沙门氏菌将构建好的质粒pGCsiRNA-VEGF携带进入裸鼠瘤内通过一个月的时间观察裸鼠瘤大小绘制生长曲线,然后处死,将裸鼠瘤称重,并利用取下的裸鼠瘤组织利用HE染色检测组  织结构变化及细胞死亡情况、免疫组化方法检测VEGF蛋白表达情况、蛋白印迹检测VEGF,MMP2,MMP9蛋白表达情况以及PCR技术检测组织中VEGF,MMP2,MMP9mRNA表达情况。  结果:本实验成功构建胆管癌裸鼠瘤模型并通过携带有质粒pGCsiRNA-VEGF减毒沙门氏菌靶向治疗后,治疗组的肿瘤体积和重量明显小于对照组和质粒(P<0.05)通过实验PCR及Western blot结果显示质粒pGCsiRNA-VEGF分别抑制了VEGF,MMP2,MMP9在转录和翻译上的表达,HE染色镜下观察到质粒治疗组能促进组织凋亡,使组织结构破坏,免疫组化镜下观察到质粒组抑制VEGF蛋白的表达。  结论:通过构建胆管癌裸鼠瘤模型后利用携带有质粒pGCsiRNA-VEGF的减毒沙门菌对裸鼠瘤的靶向治疗,实验证明在体内沉默VEGF可以影响细胞生存率、抑制细胞迁移、侵袭、发展,其机制可能与促进细胞凋亡并抑制MMP2及MMP9表达有关。本研究结果为胆管癌基因治疗提供新的有效的途径。
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