乳腺癌是女性中与癌症相关死亡的最主要的原因之一。近些年来，虽然化疗作为一种有效的治疗手段，使乳腺癌的死亡率有所下降。但是，肿瘤细胞对化疗药物的耐药性仍是目前临床上一个普遍存在的问题。在众多的化疗药物中，环磷酰胺(cyclophosphamide，CTX)通过破坏DNA而引起细胞毒性，是治疗乳腺癌的常用药物之一，同样也存在着耐药的问题。　　 在许多肿瘤中高表达的骨桥蛋白(osteopontin，OPN)，最近被发现能通过抑制细胞凋亡而诱导肿瘤细胞对一些化疗药物产生耐药性。另外，最近的研究表明，在肝细胞癌中骨桥蛋白的下调能通过诱导细胞凋亡提高细胞对化疗药物的敏感。然而下调骨桥蛋白能否增加乳腺癌细胞对环磷酰胺药物的敏感性尚不清楚。而且，越来越多的研究表明p38 MAPK信号通路有促进细胞凋亡的作用，一些化疗药物通过激活p38 MAPK信号通路引起细胞凋亡，说明p38 MAPK信号通路在凋亡介导的化疗敏感性中发挥着重要作用。然而，OPN的下调能否通过激活p38 MAPK信号通路诱导细胞凋亡从而增加MDA-MB-231细胞对环磷酰胺药物的敏感性还未被研究过。因此，我们猜想OPN下调能通过激活p38 MAPK信号通路增强细胞凋亡从而加强环磷酰胺对MDA-MB-231细胞的作用。　　 第一部分：骨桥蛋白对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响　　 目的：探讨骨桥蛋白下调对乳腺癌MDA-MB-231细胞系的影响。方法：人乳腺癌MDA-MB-231细胞系分为三组，包括pS-OPN，pS-CO及WT组。pS-OPN组是转染OPN siRNA的细胞(实验组)；pS-CO是转染对照siRNA序列载体的细胞(阴性对照组)；WT是未经转染的细胞(空白对照组)。用Western Blot检测蛋白的表达水平；用实时定量PCR检测OPN mRNA的水平；用MTT法检测细胞存活率；用流式细胞仪检测细胞周期的变化情况；用TUNEL检测细胞凋亡的情况。结果：与pS-CO组和WT组细胞相比，pS-OPN组细胞表达的OPN mRNA以及OPN蛋白的水平明显降低。pS-OPN组的细胞增殖相对于pS-CO组和WT组显著地减慢而细胞凋亡率却显著地高于后两组。然而，三组细胞的细胞周期分布相似。另外，pS-OPN组的p38蛋白以及p-p38蛋白的表达水平高于pS-CO组和WT组，而用p38 MAPK抑制剂SB202190预处理的pS-OPN组表达的p38和p-p38蛋白的水平却低于pS-OPN组。用SB202190预处理的pS-OPN组细胞凋亡率显著地低于pS-OPN组。结论：OPN的下调能够通过激活p38 MAPK信号通路诱导细胞凋亡，从而抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖。　　 第二部分：环磷酰胺对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响　　 目的：探讨环磷酰胺对人乳腺癌MDA-MB-231细胞系的作用。方法：用MTT法检测乳腺癌MDA-MB-231细胞是否对环磷酰胺敏感；用TUNEL实验检测环磷酰胺是否能诱导细胞凋亡；用Western Blot检测p38蛋白和p-p38蛋白的表达水平。结果：MTT结果显示乳腺癌MDA-MB-231细胞对环磷酰胺敏感；TUNEL实验的结果表明环磷酰胺能诱导细胞凋亡和激活p38 MAPK信号通路。SB202190能显著抑制环磷酰胺所诱导的细胞凋亡和其激活p38 MAPK信号通路的水平；另外，SB202190能显著抑制环磷酰胺对乳腺癌MDA-MB-231细胞产生的细胞毒作用。结论：环磷酰胺通过激活p38 MAPK信号通路诱导细胞凋亡，从而产生其细胞毒性作用。　　 第三部分：骨桥蛋白对环磷酰胺药物敏感性的影响　　 目的：明确OPN的下调能否影响人乳腺癌MDA-MB-231细胞系对环磷酰胺的敏感性。方法：我们用MTT法检测乳腺癌MDA-MB-231细胞是否对环磷酰胺敏感；用TUNEL实验检测细胞凋亡的情况；用Western Blot检测p38蛋白和p-p38蛋白的表达水平。结果：OPN的下调提高了乳腺癌MDA-MB-231细胞对环磷酰胺药物的敏感性。OPN的下调和环磷酰胺能够协同的诱导细胞凋亡以及激活p38 MAPK信号通路。而且，SB202190能明显抑制两者的协同作用。结论：OPN的下调通过其与环磷酰胺的协同作用激活p38 MAPK信号通路而诱导细胞凋亡，从而使人乳腺癌MDA-MB-231细胞系对环磷酰胺更为敏感。　　 小结　　 我们的研究证实了骨桥蛋白的下调能够增加人乳腺癌MDA-MB-231细胞系对环磷酰胺的药物敏感性。另外，我们发现骨桥蛋白的下调以及环磷酰胺均能通过激活p38 MAPK信号通路而诱导细胞凋亡，而且二者能够协同地通过激活p38MAPK信号通路而诱导细胞凋亡。而抑制p38 MAPK信号通路的激活能够减弱细胞凋亡程度以及降低乳腺癌MDA-MB-231细胞对环磷酰胺药物的敏感性。因此，骨桥蛋白的下调能通过激活p38 MAPK信号通路而诱导细胞凋亡从而增加乳腺癌MDA-MB-231细胞对环磷酰胺的敏感性。