大鼠子宫去细胞化支架的制备和鉴定

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目的:  通过去细胞化灌注技术,探讨成功制备天然子宫去细胞化生物支架的理想灌注策略,并通过系统的评价体系,以鉴定其能否作为子宫组织再生工程研究的良好应用载体。  方法:  以健康成年雌性SD大鼠为实验对象,以子宫动脉作为灌注入路,通过物理冻融、胰酶酶解及曲亚通(TritonX-100)为主辅以十二烷基硫酸钠(SDS)的洗脱灌注组合等流程,获取子宫去细胞支架。并通过大体形态观察、美兰染色、组织病理学观察、基因组DNA定量分析、细胞因子含量测定、电镜观察、胶原蛋白总量检测及主要胶原成分鉴定及免疫原性实验等对去细胞化后的子宫支架进行全面的评价。  结果:  成功建立动脉灌注入路并获得了肉眼透明的子宫去细胞化支架,HE染色观察和透射电镜结果均显示去细胞支架内无有核细胞残留,DNA含量检测证实支架内DNA 残留量不足正常子宫的5%,美兰染色和扫描电镜显示支架的脉管网络和空间结构保存完整;而胶原蛋白的定量定性分析表明去细胞化后支架的细胞外基质成分保留得较为完整,酶联免疫吸附试验(ELISA)结果显示去细胞化支架中细胞因子EGF、bFGF、TGF-β仍能大部分保留,表明其仍具备一定的生物活性。并且经过皮下包埋实验显示,支架组织与受体排斥较轻,证实去细胞化子宫支架具有良好的组织相容性。  结论:  本研究方法能够成功制备理想的子宫去细胞化支架,并且经过全面评价,支架的基质成分和理化特性完整保留,能够作为子宫组织工程研究的良好载体选择。
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