论文部分内容阅读
目的:探讨益气养阴解毒方诱导白血病K562/A02耐药细胞凋亡的作用机制。方法:①细胞培养:K562、K562/A02细胞株分别接种于含10%胎牛血清的RPMI1640培养液,在37℃、5%CO2条件下培养,取对数生长期细胞,2-3天传代一次,更换细胞液;②含药血清的制备:新西兰大白兔12只,随机分为实验组及对照组,每组6只。实验组予益气养阴解毒方中药浓缩药液连续灌胃3天,对照组予蒸馏水27ml灌胃,两组于最后一次灌胃后2h,无菌条件下心脏取血,分离血清即为含药血清,同组血清混合,-20℃保存备用。③MTT法检测益气养阴解毒方含药血清对K562、K562/A02的细胞增殖及细胞毒作用;流式细胞仪(FCM)检测益气养阴解毒方含药血清对K562/A02细胞的凋亡及Bcl-2、P53的表达,免疫组化法检测益气养阴解毒方含药血清对K562/A02细胞内凋亡抑制蛋白Survivin的表达。结果:①益气养阴解毒方含药血清作用于白血病K562/A02细胞,各浓度含药血清均具有抑制K562/A02细胞增殖的作用,且各组间差异有统计学意义(P<0.05),其中药血清IC10值为16.7%。②益气养阴解毒方含药血清可以明显增加K562、K562/A02细胞的凋亡率各浓度的含药血清中以K562/A02细胞24h凋亡率最低,72h凋亡率最高。中药含药血清联合柔红霉素组对K562/A02细胞的凋亡率有协同作用,含药血清高剂量组48h凋亡率为39.19±1.39,中剂量组凋亡率为36.43±1.09,低剂量组凋亡率为32.70±1.48,含药血清与柔红霉素联合用药组为45.01±1.74,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。③益气养阴解毒方含药血清对K562/A02细胞内凋亡抑制基因Bcl-2表达的影响,48h后含药血清高剂量组荧光强度为431.67±0.86,中剂量组为453.69±0.40,低剂量组为516.66±0.40,含药血清与柔红霉素联合用药组为218.48±1.53,各组间差异显著有统计学意义(P<0.01)益气养阴解毒方含药血清对K562/A02细胞内P53抑癌基因表达的影响,48h后含药血清高剂量组的荧光强度为234.33±12.22,中剂量组为192.33±4.04,低剂量组为172.00±6.00,含药血清与柔红霉素联合用药组为292.33±7.02,各组间差异显著有统计学意义(P<0.01)。④益气养阴解毒方含药血清对K562/A02细胞内凋亡抑制蛋白Survivin (?)内表达的影响,空白对照组Survivin蛋白表达呈强阳性,含药血清低剂量组表达强度高于中、高剂量组,含药血清与柔红霉素联合用药组蛋白阳性率表达最弱,细胞膜及细胞质呈棕黄色,且随药物剂量的增加而表达降低,各组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:益气养阴解毒方含药血清可以诱导白血病K562/A02细胞的凋亡,其可能的机制与增强K562/A02的细胞毒作用、下调凋亡基因Bcl-2、凋亡抑制蛋白Survivin的表达及上调抑癌基因P53的表达有关。