油菜HXK9基因功能初探

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糖代谢是植物体内的主要代谢过程,葡萄糖只有经过己糖激酶(HXK)催化成葡萄糖-6-磷酸后才能进入糖酵解途径,为植物体的生长发育和代谢活动提供物质和能量。通过高油/低油近等基因系转录组测序发现HXK9在脂肪酸代谢中有重要的作用,利用RNA干扰技术构建RNAi载体,利用花粉介导法将RNA干扰的HXK9基因转入甘蓝型油菜品系7B中,对HXK9基因的功能进行了初步研究。研究发现:1.整合的RNAi-HXK9基因在后代植株中可以稳定遗传,性状分离符合孟德尔分离定律;2.通过q RT-PCR测定发现RNAi植株中HXK9基因的表达量明显降低了,为野生型植株的23.59%-66.94%;3.在种子萌发期,与野生型植株相比RNAi植株幼苗的胚轴伸长、根长和侧根数都明显减小,出真叶的时间比野生型幼苗晚2-3天;4.在植株生长过程中RNAi植株的株型小于野生型植株,叶子形状也更加卷曲;5.RNAi植株的现蕾时间与野生型相比提前了26-41天;花器官出现了全部或是部分败育的情况,花粉的萌发率严重降低,种子的体积和千粒重减小了;6.RNAi植株叶子的表面有透明粘稠状液体的分泌,通过苯酚-硫酸实验证明为糖类,且RNAi植株叶表面分泌的糖含量高于野生型植株。7.在植物体内糖代谢和脂代谢密切相关,RNAi植株中HXK9基因的表达量明显降低了,GPAT6基因为脂代谢过程中的关键基因,通过q RT-PCR发现RNAi植株中GPAT6基因的表达量显著降低,为野生型植株的23.62%-34.93%。8.HXK9基因和HXK1b、HXK2a、HXK3a基因是同源基因,通过q RT-PCR表明,RNA干扰植株中的HXK9基因后,HXK1b、HXK2a、HXK3a基因的表达量也明显降低了。9.己糖激酶与植物的光合作用密切相关。RNAi植株叶片中的叶绿素含量比野生型植株提高了18.83%-45.79%。POR基因为叶绿素合成过程的关键基因,q RT-PCR结果表明,RNAi植株中POR基因的相对表达量显著升高,为野生型植株的245.53%-356.06%。RNAi植株的净光合速率也比野生型植株提高了96.77%-380.65%。10.甲苯胺蓝染色实验表明:RNAi植株叶片的染色面积大于野生型植株,并且RNAi植株叶片中叶绿素的溶出速率也大于野生型植株。
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