丹芍化纤胶囊对大鼠纤维化肝脏Calpain表达的影响

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目的:观察在大鼠肝纤维化形成过程中超氧化物歧化酶(SOD)活性、钙蛋白酶(Calpain)和核转录因子(NF-κ B)表达的变化,旨在探讨肝纤维化发生机制中Calpain的作用。应用中药复方丹芍化纤胶囊预防大鼠肝纤维化,观察其对Calpain表达的影响,探讨其预防肝纤维化可能的机制与Calpain的关系。  方法:雄性SD大鼠24只,随机分为正常组、肝纤维化组(肝纤组)、丹芍化纤胶囊预防组(丹芍组)。肝纤组和丹芍组大鼠采用CCl4和高脂低蛋白饮食复合病因刺激制备肝纤维化大鼠模型,造模时间为8周。从造模开始起,丹芍组大鼠同步给以0.1g/kg/d剂量丹芍化纤胶囊灌胃,共8周。实验结束时杀鼠取血,测定血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、透明质酸(HA)及肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性。取肝脏,称重,固定,切片,行HE和Masson染色,光镜下观察肝组织的病理变化,并用免疫组化分别检测肝组织中Calpain、NF-κB和α-SMA的表达。  结果:(1)与正常组比较,肝纤组大鼠血清中内AST、ALT、HA明显增高(p<0.01),而肝组织内SOD活性明显降低(p<0.01);(2)病理组织学检查发现肝纤组大鼠肝脏汇管区纤维组织增多,肝组织内纤维结缔组织明显增生,形成条索深入肝小叶内,纤维间隔粗大,部分肝小叶结构完全破坏消失,假小叶形成,正常组大鼠肝脏组织无异常;(3)免疫组化结果显示肝纤组与正常组比较,肝组织内Calpain、 NF-κB和α-SMA的表达较正常组显著增加(p<0.01或p<0.05)。(4)经丹芍化纤胶囊干预8周后,丹芍组大鼠与肝纤组大鼠比较,丹芍组大鼠肝脏AST、ALT和HA明显降低(p<0.01),但与正常组比较,丹芍组大鼠肝脏内ALT,HA增高依然明显(p<0.01);丹芍组大鼠肝组织内SOD活性较肝纤组大鼠明显升高(p<0.01),与正常比较,丹芍组大鼠肝脏内SOD明显降低(p<0.01);HE和Masson染色发现,丹芍组大鼠肝细胞脂肪变性明显,可见液化坏死为主,炎性细胞浸润,肝细胞再生较明显,结缔组织增生程度较肝纤组减轻,未见明显假小叶形成;免疫组化结果显示丹芍组大鼠肝脏中Calpain、α-SMA的表达较肝纤组显著减少(p<0.01或p<0.05),而NF-κB的表达量较肝纤组有减少,但无统计学意义;(5)pearson相关性分析显示,正常组与肝纤组大鼠肝组织内Calpain的表达与SOD的活性呈负相关性(p<0.01);Calpain与NF-κB的表达呈正相关(p<0.05)。  结论:1.Calpain可能参与了肝纤维化发生过程中肝细胞的损伤;2.肝纤维化组织中SOD活性下降可能与Calpain的表达增多有关;3.Calpain可能通过活化NF-κB的表达起到促进肝纤维化的作用;4.丹芍化纤胶囊对肝组织内Calpain的表达有显著的抑制作用,其机制可能通过显著提高SOD的活性,抑制Calpain的表达,减少NF-κB的表达从而抑制HSC的活化和细胞外基质的生成的共同作用起到抗肝纤维化作用。
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