鄯善县绵羊染蜱情况调查及重组Cathepsin L免疫的抗蜱效果分析

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硬蜱是一种叮咬家畜和人类后传播多种疾病的体表寄生虫。宿主被硬蜱叮咬后,被叮咬的体表部位会出现皮炎及伤口脓肿等症状,蜱虫还可以储存和传播各种人类及动物的病原体,造成的经济损失巨大。尽管应用化学药物防控蜱虫有许多缺点存在,但仍然是目前蜱虫防控的主要手段。因此使用抗蜱疫苗被认为是一种无毒,低污染和有效的控制蜱的方案。本研究以新疆鄯善县5个村庄为试验点,采集该区域羊体表和自然环境中的蜱虫,并进行形态学鉴定,统计分析其种类及分布;同时,应用重组亚洲璃眼蜱组织蛋白酶L(r Has CPL)免疫绵羊,检测其抗体效价,进行抗亚洲璃眼蜱保护性试验,为鄯善县春季蜱虫的综合防控工作及亚洲璃眼蜱半胱氨酸蛋白酶的应用奠定基础。(1)为系统了解鄯善县春季蜱虫种类及分布情况,2021年于3~5月份在鄯善县的五个村用任意抽样法抽取30只羊,共150只。进行蜱虫样品的采集,分别从150只羊体表和自然环境中采集到1 392和1 007只蜱虫。利用体式显微镜进行观察,进行蜱虫形态学鉴定,并统计分析羊只携带蜱虫情况及其种类。调查结果显示,归为2科3属5种,其蜱种分别为硬蜱科的亚洲璃眼蜱、小亚璃眼蜱、血红扇头蜱和图兰扇头蜱以及软蜱科的拉合尔钝缘蜱。其中5月份羊体表染蜱率和蜱指数最高,分别为68.66%和843,说明鄯善县春季蜱虫流行高峰期为5月份。不同试验点之间也存在差异,其中卡格托尔村的羊染蜱情况较为严重,共计采集1 326只,占比55.27%。羊体表采集的蜱虫共1 392只,多为亚洲璃眼蜱(占48.99%),环境中采集的蜱虫均为亚洲璃眼蜱,说明亚洲璃眼蜱为当地的优势蜱种。(2)在鄯善县蜱类分布调查的基础上,以亚洲璃眼蜱为研究对象,将r Has CPL作为抗蜱疫苗的候选抗原,针对鄯善县本地绵羊进行免疫保护性抗亚洲璃眼蜱试验。将纯化后的r Has CPL蛋白与氢氧化铝佐剂乳化后,以绵羊为模型,按常规方法在绵羊颈部皮下多点注射免疫(0.5 m L/只)。免疫后第7、14、21、28、35、42、52、70和78天,对受试绵羊颈静脉采血,并分离出血清,采用ELISA法检测绵羊血清抗体水平,再用Western blot方法检测r Has CPL蛋白多抗血清反应性。三免后第25天,将亚洲璃眼蜱(成蜱)感染于绵羊耳廓,观察抗蜱效果。结果显示,绵羊免疫r Has CPL蛋白后未出现异常情况。ELISA结果显示,二免后第21天抗体水平达到了最高水平1∶2 5600,一直到第42天维持较高的抗体水平,随后抗体水平开始缓慢下降。Western blot结果显示,绵羊多克隆抗体血清能与r Has CPL蛋白发生特异性反应。接种亚洲璃眼蜱后,实验组雌蜱的染蜱率(65%)和饱血率(30.61%)明显低于对照组的(75.83%)和(75.47%);实验组亚洲璃眼蜱的死亡率(24.17%)相对于对照组的(13.33%)高;实验组和对照组的饱血体重、卵重和卵孵化率相比有显著差异(P<0.05)。该研究结果表明,用r Has CPL蛋白免疫实验组绵羊后,绵羊产生了特异性抗r Has CPL蛋白的血清,免疫效果为63.13%,说明r Has CPL蛋白可作为抗亚洲璃眼蜱候选抗原。
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