猪δ冠状病毒（PDCoV）属于冠状病毒科中新鉴定的δ冠状病毒属,由香港学者于2012年从猪粪便样品中首次发现,但当时未深入开展病毒分离与致病性研究。2014年2月美国学者从爆发腹泻的猪场检测到PDCoV并成功分离到病毒,动物实验证实分离毒株对新生仔猪具有很强的致病性,感染仔猪表现为食欲下降、呕吐、严重腹泻等,随后美国相继至少有20个州报道PDCoV的流行。继美国报道PDCoV后,加拿大、韩国、泰国、越南、老挝等国家均从猪腹泻样品中检测到PDCoV的流行,且报道显示泰国毒株对仔猪、育肥猪、母猪均具有较强的致病性,导致起大量仔猪的死亡,引起了全球养猪业的高度重视。而目前有关我国PDCoV流行情况的研究比较少。鉴于此,我们对我国部分省市腹泻猪群的PDCoV感染情况进行了流行病学调查,对PDCoV阳性样品进行了全基因组测序分析和病毒分离鉴定,并对分离的PDCoV毒株进行了传代致弱。主要研究内容如下:1.国内部分地区PDCoV的流行病学调查利用建立的检测PDCoV M基因的RT-PCR方法对2014年11月至2017年2月采自湖北省、江苏省、河南省等地区的猪腹泻样品以及本实验室保存的2004年至2014年的猪腹泻样品进行了检测,结果从大部分地区的猪腹泻样品中均检测到了PDCoV,总阳性率为15.05%,且我们保留的一份来自安徽省的2004年的猪腹泻样品检测为PDCoV阳性。证实PDCoV在国内猪群中已广泛流行,且早在至少2004年就已经存在于我国的猪群中。2.PDCoV CHN-HN-2014株的分离鉴定将RT-PCR检测为PDCoV阳性的样品处理后接种LLC-PK1细胞进行了病毒分离,并从一份2014年来自河南省的腹泻仔猪肠内容物中,首次分离到一株能够在LLC-PK1细胞上稳定增殖的PDCoV毒株,通过观察细胞病变、RT-PCR检测、间接免疫荧光检测和电镜观察等证实所分离的病毒确实为PDCoV,于是将其命名为PDCoV CHN-HN-2014株。动物试验证实该分离毒株对5日龄和21日龄仔猪均具有较强的致病性,能够导致仔猪出现呕吐、腹泻等典型的肠道疾病症状。3.PDCoV基因组序列分析选取3份分别来自2004年安徽省、2014年江苏省和2014年湖北省的PDCoV阳性样品进行了全基因组测序,将这3株病毒的全基因组序列和PDCoV CHN-HN-2014分离株的全基因组测序与已有报道的其他PDCoV全基因组序列进行了比对分析,结果显示所有PDCoV序列间具有较高的同源性（89.6%-99.9%）;在与其他属的冠状病毒一起进行遗传进化分析时发现所有PDCoV基因组序列均聚类在δ冠状病毒分支中;在只有PDCoV毒株基因组序列的遗传进化分析中,美国、韩国毒株聚类在一个较大的分支中,泰国、越南、老挝毒株位于另一独立的分支中;中国部分省市地区的不同毒株与美国、韩国毒株进化关系相对较近,但属于不同的进化分支。通过对PDCoV不同基因的遗传进化分析显示,使用S基因序列进行遗传进化树分析的结果与PDCoV全基因组序列进行的遗传进化分析结果比较相似,提示S基因可以作为不同毒株遗传进化分析时的主要分析对象。4.PDCoV CHN-HN-2014株传代致弱研究将PDCoV CHN-HN-2014株在LLC-PK1细胞上连续传至F100代,经细胞病变观察和TCID50检测证实PDCoV CHN-HN-2014株在LLC-PK1细胞上传至100代后仍然能够稳定的增殖,且随着传代次数的增加其增殖滴度逐渐上升,F100代的TCID50已达到109.33/m L。选取其中的F20代、F40代、F60代、F80代和F100代病毒进行了全基因组序列测序分析,结果与F10代相比在传代后其基因组没有出现较大的缺失或插入突变,只存在一些单个的碱基位点突变,且比对结果显示PDCoV S蛋白、E蛋白和NS7蛋白中氨基酸突变率相对较高,分别为2.16%、2.41%和2%。动物试验结果证实PDCoV CHN-HN-2014株F20代与F10代相比其对5日龄仔猪的毒力已有所下降,F40代后的病毒对5日龄仔猪基本已不致病。