论文部分内容阅读
目的:胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤。世界范围内,胃癌占目前肿瘤死亡率的第二位。在我国其发病率和死亡率居恶性肿瘤首位。大多数患者就诊时已处于晚期,手术往往难以根治,而包括化疗在内的其它治疗手段尚不能令人满意,其原因是多方面的,胃癌细胞的凋亡抵抗被认为是其中一个重要原因。所以深入研究凋亡发生的机制,寻找逆转肿瘤细胞凋亡抵抗的分子靶点成为目前研究的热点。凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein family, IAP)家族正因在凋亡抵抗中可能起重要作用而日益受到重视。Livin是这个家族的新成员,有两种长度不同的剪接异构体,Livinα和Livinβ。目前研究提示Livin可能与肿瘤发生、发展有关,并可能在肿瘤细胞凋亡的抵抗发挥重要作用,但Livin在胃癌组织中的表达情况及对胃癌细胞药物敏感性的影响研究未见报导,值得进一步研究。我们通过免疫组化及RT-PCR两种方法检测胃癌组织中凋亡抑制蛋白Livin的表达,分析其与临床生物学行为关系的研究,并探讨其与CTX、VCR、ADR、CDDP、5-Fu、MMC、L-OHP、CPT-11、VP-16等九种化疗药物敏感性的关系,为胃癌的治疗提供一个新靶点,指导临床化疗药物筛选,从而实现个体化化疗。方法:选取在河北医科大学第四医院外三科2005年10月~2006年3月手术切除的新鲜胃癌组织及相应正常胃粘膜(距肿瘤边缘>5cm)标本50例,送病理证实并通过免疫组织化学染色检测Livin蛋白的表达情况。选取2006年9月～2007年6月手术切除的新鲜胃癌组织及相应正常胃粘膜(距肿瘤边缘>5cm)标本40例,经病理证实并通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Livin mRNA的表达情况。所有病人手术前均未行放化疗。分析Livin蛋白及mRNA表达情况与胃癌患者性别、年龄、肿瘤部位、大小、大体分型、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、临床分期等临床生物学行为的关系。另外,所有病人均取一份癌组织用以制备癌细胞单细胞悬液,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法分别检测CTX、VCR、ADR、CDDP、5-Fu、MMC、L-OHP、CPT-11、VP-16等九种化疗药物对胃癌细胞OD值(吸光度),计算出CI值(抑制率)。并分析其与Livin表达的关系。结果:1胃癌组织中Livin表达的免疫组化法检测结果1.1 Livin蛋白在胃癌组织中的表达50例胃癌组织中Livin蛋白表达的阳性率为62.0%(31例),相应的正常胃粘膜只有12.0%(6例),两者比较具有显著性差异(P<0.05)。1.2 Livin蛋白的表达与临床生物学行为的关系Livin蛋白的表达与胃癌的浸润深度、分化程度、有无淋巴结转移及PTNM分期有关。T1+T2期Livin阳性表达率为33.33%(6/18),而T3+T4期为78.13%(25/32),两组间比较有显著性差异(P<0.05);高中分化的Livin的阳性表达率为43.50%(10/23) ,低未分化的Livin的阳性表达率为77.80%(21/27),两组间比较有显著性差异(P<0.05);有淋巴结转移的Livin阳性表达率为73.53%(25/34),无淋巴结转移的阳性表达率为37.50%(6/16),两组间比较有显著性差异(P<0.05);Ⅰ+Ⅱ期的Livin阳性表达率为40.10%(9/22),Ⅲ+Ⅳ期的阳性表达率为78.60%(22/28),两组间比较有显著性差异(P<0.05)。Livin蛋白在胃癌组织中的阳性表达率与患者的性别、年龄、肿瘤部位、大小及大体分型无相关性(P >0.05)。1.3 Livin蛋白的表达与药物敏感性的关系MTT法检测到所有化疗药物对胃癌细胞均有一定的抑制作用,胃癌细胞对不同化疗药物的敏感性依次为CDDP(37/50)>L-OHP(34/50)>5-FU(30/50)> VCR(29/50)>ADR(28/50)>CTX(26/50)>CPT-11(24/50)> MMC(22/50)>VP-16(19/50)。Livin蛋白的表达与5-FU、VCR、ADR和VP-16四种化疗药物的敏感性有关(P均<0.05),Livin的表达可降低这几种药物对胃癌肿瘤细胞抑制率。2胃癌组织中Livin表达的RT-PCR法检测结果2.1 Livin mRNA在胃癌组织中的表达40例胃癌组织中Livin mRNA表达的阳性率为57.50%(23/40),相应的正常胃粘膜中只有12.50%(5/40),两者比较具有显著性差异(P<0.05)。2.2 Livin mRNA的表达与临床生物学行为的关系Livin mRNA的表达与胃癌的浸润深度、分化程度、有无淋巴结转移及PTNM分期有关。T1+T2期Livin阳性表达率为22.22%(2/9),而T3+T4期为67.74%(21/31),两组间比较有显著性差异(P<0.05);高中分化的Livin mRNA的阳性表达率为40.00%(8/20),低未分化的Livin的阳性表达率为75.00%(15/20),两组间比较有统计学差异(P<0.05);有淋巴结转移的Livin阳性表达率为70.0%(21/30),无淋巴结转移的阳性表达率为20.0%(2/10),两组间比较有显著性差异(P <0.05);Ⅰ+Ⅱ期的Livin阳性表达率为22.22%(2/9),Ⅲ+Ⅳ期的阳性表达率为78.60%(21/31),两组间比较有统计学差异(P<0.05)。Livin mRNA在胃癌组织中的阳性表达率与患者的性别、年龄、肿瘤部位、大小及大体分型无相关性(P >0.05)。2.3 Livin mRNA的表达与药物敏感性的关系MTT法检测到所有化疗药物对胃癌细胞均有一定的抑制作用,胃癌细胞对不同化疗药物的敏感性依次为:CDDP(26/40)>5-FU(26/40)> L-OHP(25/40)> ADR(18/40)> VCR(17/40)>CPT-11(16/40)>VP-16(15/40)>MMC(8/40)>CTX(7/40)。Livin mRNA的表达与5-FU、VCR、ADR和VP-16四种化疗药物的敏感性有关(P均<0.05),Livin的表达可降低这几种药物对胃癌肿瘤细胞抑制率。结论:1胃癌组织Livin蛋白的表达率高于正常胃粘膜,提示它参与了胃癌的发生,可作为一个目标抗原来检测胃癌,可能成为胃癌治疗的新分子靶点。2 Livin蛋白的表达在T3+T4组、低未分化组、有淋巴结转移组、Ⅲ+Ⅳ期组的表达率都明显高于T1+T2组、高中分化组、无淋巴结转移组、Ⅰ+Ⅱ期组,其高表达说明了胃癌恶性程度高,易发生侵袭和转移,反映了胃癌的临床病理进展。3 Livin蛋白的表达与性别、年龄、胃癌的生长部位、大小及大体类型无关(P >0.05)。4 Livin蛋白的表达对化疗的效果有重要影响,其检测有助于临床抗癌药物的选择,从而实现个体化化疗。5胃癌组织Livin mRNA表达率高于正常胃粘膜,与蛋白表达水平一致,也提示它参与了胃癌的发生,可作为一个目标抗原来检测胃癌,可能成为胃癌治疗的新分子靶点。6 Livin mRNA的表达在T3+T4组、低未分化组、有淋巴结转移组、Ⅲ+Ⅳ期组的表达率都明显高于T1+T2组、高中分化组、无淋巴结转移组、Ⅰ+Ⅱ期组,与蛋白表达水平一致,其高表达也说明了胃癌恶性程度高,易发生侵袭和转移,反映了胃癌的临床病理进展。7 Livin mRNA的表达与性别、年龄、胃癌的生长部位、大小及大体类型无关(P >0.05)。8 Livin mRNA的表达对化疗的效果有重要影响,其检测有助于临床抗癌药物的选择,从而实现个体化化疗。