论文部分内容阅读
珍稀观赏动物的球虫疾病报道近年来逐渐增多。笔者对黑龙江省某动物园的92只猫科动物进行了球虫感染调查并进行了六种粪检法检测效力的测定,结果teleman法+饱和盐-糖溶液漂浮法为最佳的检测方法,其球虫卵囊检出率为17.39%(16/92),其中幼龄动物感染明显多于成年动物。对球虫卵囊培养后进行形态学观察:未孢子化卵囊多数呈卵圆形,平均长为45.875μm,平均宽为34.775μm,形状指数为1.19。卵壁光滑没有颜色。卵膜共分两层,外层薄而无色,内层厚呈黑色。无卵膜孔,无极粒,无残体。卵囊孢子化后,胚囊分裂成为两个孢子囊,每个孢子囊中含有四个子孢子,残体清晰可见。孢子囊呈椭圆形,平均长为26.875μm,平均宽为22.375μm,形状指数为1.25。提取虫体基因组DNA,并根据GenBank上发表的猫等孢球虫核糖体内转录间隔区Ⅰ(Cystoisospora felis internal transcribed spacer 1, ITS1)序列设计引物,对目的片段进行PCR扩增和序列测定。应用DNAStar软件,将长为389bp的目的片段与Genbank中发表的19种球虫相应的ITS1序列进行同源性比较,序列分析显示东北虎源球虫与其它19种球虫相应序列同源性为38.11%～98.71%之间,其中与等孢球虫的同源性为55.64%～98.71%之间。综合对东北虎源球虫形态学观察、PCR扩增其ITS1序列并进行序列分析,构建分子进化树及系统发生关系的分析以及动物感染实验,确定东北虎源球虫为等孢属球虫,并且与猫等孢球虫亲缘最近。应用单卵囊分离技术,获得东北虎源等孢球虫纯种卵囊。分别给猫感染30、103、104个孢子化卵囊,观察猫的排卵囊规律,包括潜隐期、显露期、排卵囊高峰期及每克粪便中卵囊数(OPG值)。通过对比,验证了潜隐期、显露期、OPG值与感染剂量存在相关关系,即感染剂量越小,潜隐期越长,显露期越长,OPG值越小;反之亦然。感染30个卵囊的猫无明显临床病征;感染103个卵囊的猫腹泻出现少量血便;感染104个卵囊的猫水样腹泻后出现大量血便。感染103与104个孢子化卵囊的猫完成卵囊排放,于10d后再次感染103个孢子化卵囊,观察猫的排卵囊规律,包括潜隐期、显露期、排卵囊高峰期及OPG值。结果表明感染强度与免疫力存在正相关关系,即首次感染强度较大组产生的免疫记忆较强,再次感染相同剂量卵囊后,其卵囊排出数量少,表现出的病症也相对较轻。妥曲株利和莫能菌素分别按0.4ml·kg-1bw和15mg·kg-1bw喂猫并于当日接种104个孢子化卵囊,首次用药后24h再给药一次。于感染后三天(PID3)开始,用饱和糖-盐水溶液漂浮法检查粪便,观察猫的排卵囊规律,包括潜隐期、显露期、排卵囊高峰期及OPG值。结果表明两预防组均无卵囊检出,妥曲株利与莫能菌素给药后均可有效地预防等孢球虫感染。给猫感染104个孢子化卵囊,于卵囊始现日将妥曲株利和莫能菌素分别按0.4ml·kg-1bw和15mg·kg-1bw喂猫,首次用药后24h再给药一次。结果给药后,两治疗组的卵囊排出强度快速下降。与莫能菌素相比,百球清表现出更强、更快的杀虫和抑虫作用,其治疗效果更为优秀。利用妥曲株利和莫能菌素进行药物预防和治疗实验的猫,于粪中卵囊最早消失的时间延后10d,再次感染104个孢子化卵囊,于PID3开始,用饱和糖-盐水溶液漂浮法检查粪便,观察猫的排卵囊规律,包括潜隐期、显露期、排卵囊高峰期及OPG值。结果表明:两药物预防组的猫再次感染卵囊后,其卵囊排出强度与正常一次感染组相似,远大于正常二次感染组。这说明猫在药物预防后感染卵囊未获得免疫记忆,因此再次感染球虫后卵囊的排出强度没有降低;而两治疗组的猫再次感染卵囊后,其卵囊排出强度远小于正常二次感染组。与莫能菌素相比,妥曲株利治疗后的猫产生了较强的免疫力,再次感染后卵囊的排出强度较小。