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刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是寄生于人和多种动物的有核细胞内的原虫,宿主种类十分广泛,包括哺乳类、鸟类、爬行类、鱼类及人类,能引起人兽共患的弓形虫病。本研究首次对19株来自不同宿主及不同地域的弓形虫的棒状体蛋白7(ROP7)基因进行PCR扩增、克隆、测序和序列分析,通过网络利用BLAST进行同源性搜索,用Clustal X1.81程序对实验获得的和GenBankTM下载的弓形虫rop7基因序列进行比对,然后用PUZZLE4.1程序分析各个虫株之间的遗传距离。同时利用DNAstar5.0中的Megalign程序进行相似性分析并计算碱基组成、转换、颠换分析。结果显示,19个虫株均得到1728 bp的rop7基因序列,共检测到8个变异位点,变异率为0.54%。种系发育关系分析表明,rop7基因不能有效地区分弓形虫强、弱毒株,也无法区分基因型,但可作为分子标记用于弓形虫与其它原虫的种间鉴定。 本研究构建了pVAX-ROP7真核表达质粒,用PBS稀释到100μg/100μL,后退肌肉注射免疫昆明鼠,并设立空载体pVAX I、PBS和空白(Control)对照组。初次免疫后分别于第2w和第4w各加强免疫一次,测定相应的体液免疫和细胞免疫应答指标,并于三免后第14d,分别用弓形虫RH株速殖子和PRU株包囊感染昆明鼠,观察RH株实验组小鼠存活时间及PRU株实验组小鼠脑内包囊数。 研究结果显示,pVAX-ROP7 DNA疫苗免疫昆明鼠可有效地诱导产生体液免疫和细胞免疫反应,RH株实验组小鼠与RH株对照组小鼠比较,RH株实验组小鼠存活时间明显延长(P<0.05),平均存活时间13.5±6.9天,能够有效地提高昆明鼠抗弓形虫感染能力;PRU株实验组小鼠与PRU株对照组小鼠比较,PRU株实验组小鼠脑包囊数量减少约50%(P<0.05)。本研究结果为今后弓形虫疫苗的研制和应用提供一定的理论依据。