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经典荧光分析法和近二十年快速发展起来的共振光散射分析法作为重要的光谱分析法,在很多领域发挥着重要的作用。荧光分析法灵敏度高,选择性好,但要求被分析物或荧光探针具有能产生荧光发射的特定结构,因此应用范围有限。而共振光散射分析法不受此结构限制,具有实验操作简单,灵敏度高等优点,但是选择性较差。荧光和光散射信号在测定过程中都容易受到仪器操作条件,样品介质,周围环境的影响,稳定性和重现性有待提高,因此随着光谱分析法的进一步发展和应用的迫切要求,有必要不断寻找新的荧光探针和光散射探针,并对方法的某些局限性进行不断的改进和完善,以拓展其应用范围。本文根据在普通荧光光度计上单次扫描获得的共振光散射信号的增强与降低的比值建立了光散射双波长比率分析法,提高了散射分析法的稳定性和简化了双波长比率法的操作步骤,并成功用于槲皮素的分析侧定。在环境及生物化学分析领域中寻找新的荧光和散射探针方面,利用BR缓冲溶液与铅离子相互作用散射信号增强,建立了一种极其简单的铅离子共振光散射法;设计了一段颈环结构的aptamer序列,利用有机小分子染料Syber Green I与单链DNA和双链DNA的不同荧光性质,建立了简单、快速、灵敏的PrPC分析方法。具体研究内容如下:(1)以染料Syber Green I作为荧光探针,利用荧光光谱研究了人重组细胞型朊病毒蛋白PrP与aptamer的特异性作用。结果表明,Syber Green I染料嵌入颈环结构aptamer的颈部碱基对中导致荧光增强,而朊蛋白的加入又能对这种增强的荧光起到明显的猝灭效果。当朊蛋白浓度为3.69-516.6 nmol/L时,朊蛋白浓度与荧光信号强度呈很好的线性关系,相关系数R为0.998,线性方程IF=647.986-0.914xCprp,检测限为2.42 nmol/L(3σ),据此建立了简单快速灵敏的朊蛋白的分析测定方(2)利用铅离子与BR缓冲溶液的相互作用,在普通荧光光度计上扫描获得的光散射信号的强度与铅离子的浓度线性相关,建立了一种简单的测定铅含量的分析方法。该方法与其他铅测定的方法相比,具有体系简单,条件容易控制,操作步骤简单,成本低廉,效率高等优势。(3)以槲皮素(QT)与铝(Ⅲ)的相互作用为例,建立了基于单次扫描光谱获得共振光散射信号升降变化的一种全新双波长比率法。铝(Ⅲ)在醋酸-醋酸钠缓冲溶液中形成的羟基配合物,随槲皮素加入,槲皮素将羟基配合物中的铝竞争下来形成槲皮素与铝的配合物,使得280nm处的散射强度(IRLS 280)降低,444nm处的散射强度(IRLS 444)增强。结果表明Log(IRLS 280/444nm)与槲皮素浓度在2.5-25×10-5mol/L范围内呈线性关系,相关系数R2=0.998,检测限为2.5x 1 0-6mol/L。