我国是世界最大的苹果生产国,苹果栽培面积、总产量以及消费量居世界首位。苹果花叶病是苹果生产中最常见的病毒性病害,在全国普遍发生,导致果实的品质和产量下降,给苹果产业带来巨大的经济损失。最新的研究表明,苹果花叶病毒（ApMV）不是苹果花叶病的唯一病原,李属坏死环斑病毒（PNRSV）和苹果坏死花叶病毒（ApNMV）也是苹果花叶病的病原。迄今为止,NCBI共登录10条ApNMV RNA3基因组序列,其中包括1个来自日本的分离株和来自中国的9个分离株。而关于山东烟台市ApNMV分离物的研究尚未见报道。本研究调查了烟台地区苹果花叶病植株病毒的带毒情况,克隆了富士和红将军上ApNMV RNA3全长序列,分析了其基因组结构、分类地位和分子进化关系。检测了其时空表达差异,并分析了苹果、梨和月季上ApNMV的序列差异,以期为该病的防治、流行规律的判断以及致病机理研究提供理论依据。主要内容如下:1、检测了烟台市31份苹果花叶样品的带毒情况,花叶样品中ApNMV检出率为87.1%,用ApMV和PNRSV的特异引物并未扩增出目的条带,说明ApNMV与烟台地区苹果花叶病症状相关。对苹果上广泛存在的3种潜隐性病毒ASGV、ACLSV、ASPV和1种非潜隐性病毒ASSVd进行了检测,发现这4种病毒与ApNMV混合侵染率高达96.3%。2、采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术,分别在烟台地区鉴定到海棠（H281）、梨（L16）、月季（Y6）花叶样品中获得3条440nt左右的ApNMV目的片段。将海棠（H281）、梨（L16）、月季（Y6）测序结果与富士苹果中目的片段（F411）在DNAMAN中进行序列多重比对,结果表明,获得的3条海棠（H281）、梨（L16）、月季（Y6）分离物的相似性为93.78%,这3条片段与富士上序列的一致性分别为89.74%、90.58%、90.87%。系统进化分析结果表明,富士苹果（F411）与月季（Y6）进化关系最近,和梨（L16）关系较近,聚于同一分支;海棠单独聚于一分支。表明ApNMV与海棠、梨、月季中花叶病症状有关。3、分别在具有花叶症状的红将军和富士苹果叶片鉴定出苹果环斑花叶病毒（ApNMV）YF31和YF515 2条长度为1785nt和1783nt的RNA3基因组全长序列,GenBank登陆号分别为MN911185和MN911186。序列分析结果表明,所扩增的YF515和YF31均在5’UTR有约180个碱基的缺失,序列变异较大;IR区与登录序列核苷酸一致性仅为58.39-91.26%,编码区MP、CP核酸序列一致性分别为89.09%-97.52%,89.85%-96.21%;氨基酸序列一致性分别为91.79%-98.21%,90.02%-95.43%。系统进化分析表明,分离物之间没有表现出寄主特异性和地域分布规律。以邻接法构建基于氨基酸水平和核酸水平上的ApNMV分离物与Bromoviridae科其它病毒的系统发育树,结果显示,获得的2条ApNMV分离物在分类地位上属于雀麦花叶病毒科等轴不稳环斑病毒属第3亚组,与ApMV和PNRSV具有同源性,与其核苷酸一致性分别为47.28-47.77%,54.7-55.61%。将其与GenBank中登录的ApNMV、APMV和PNRSV的MP和CP序列构建系统进化树,进一步明确了ApNMV、ApMV和PNRSV进化上的差异性。4、以携带ApNMV的富士苹果树为试材,利用实时荧光定量PCR方法对不同部位、不同时间采集的样品进行ApNMV定量检测,表明环斑花叶病毒在树体内的时空分布存在差异:ApNMV在苹果植株中的相对含量由高到低依次为:芽、根、枝皮、叶片。8月15日至12月15日,9月15日ApNMV的相对含量最高,病毒相对含量最高,此后病毒相对含量下降。