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研究目的:胃肠道间质瘤(Gastrointestinal stromal tumor,GISTs)是一类胃肠道最常见的间叶源性肿瘤,具有不确定的恶性潜能。应用先进的分子生物学技术研究相关基因的变化与蛋白表达是当前人类恶性肿瘤研究的重要领域,对揭示肿瘤进展机制,指导治疗,预测预后有着非常重要的意义。本研究应用比较基因组杂交技术(comparative genomic hybridization,CGH)对我院近年来的GISTs标本进行了研究,并根据GISTs基因缺失、扩增的改变,筛选p16、nm23等指标,应用免疫组化技术检测并选取有价值的分子生物学指标为GISTs的遗传学改变及预后预测提供重要的参考依据。对象和方法:收集2006-2007年间25例新鲜GISTs标本,-80℃保存,所有标本均经术后组织学和免疫组化证实为GISTs,应用比较基因组杂交技术检测所有GISTs的细胞遗传学改变;并根据GISTs基因缺失、扩增的改变选择有价值的分子标记物(p16、PTEN、p53、Cmyc、MDM2、nm23、E2F1、Ki-67),采用免疫组化方法检测近几年来有随访资料的62例GISTs的表达情况。所有统计学分析采用SPSS 11.5软件进行。研究结果:1. PD(progressive disease-死于该肿瘤或该肿瘤发生肝脏、腹膜等邻近器官转移称为进行性疾病)。2. 25例GISTs细胞染色体均有不同程度的变化,包括染色体全部或部分的扩增或缺失,缺失多于扩增,平均每个病例缺失和扩增的频率分别为3.12和2.2。常见的缺失包括14q(60%),1p(40%)等;常见的扩增区域主要见于17q(40%),5p(32%)等。3(.1)62例GISTs中, p16在不同侵袭危险性GISTs中表达有差异(P<0.001),随着GISTs侵袭危险性的升高,p16表达强度降低。p16阳性细胞数小于50%的病例其PD病例数高于阳性细胞数50%-75%和阳性细胞数大于75%的病例,统计学分析,p16蛋白表达强度之间PD有差别(P<0.001)。(2)PTEN阴性表达率19.4%,且其表达随着肿瘤分级的增高,阴性例数增多。相关性分析表明,PTEN表达与危险度分级呈显著相关性(P<0.01),但表达强度各组之间PD差异无显著性(P>0.05)。(3)62例GISTs中有26例p53蛋白阳性表达,随肿瘤分级增高,阳性表达例数逐渐增多,肿瘤恶性度增高,p53表达增强,呈显著正相关(P<0.01)。p53(++)的病例其PD发生率高于(-)病例(P<0.05)。(4)Cmyc在GISTs中的阳性表达率为80.6%,肿瘤恶性度增高,Cmyc表达例数增多,Cmyc表达与肿瘤分级有关(P<0.001)。Cmyc (+++)的病例与(+)和(-)的病例中PD发生率有差异(P<0.01);(++)的病例与(+)和(-)病例中PD发生率有差异(P<0.05)。(5)MDM2在各级间的阳性率分别为0.0%,0.0%,15.8%,61.1%,高度危险组表达率明显高于其余三组,MDM2表达与肿瘤恶性度有关(P<0.05)。MDM2阳性细胞数(++)的病例PD发生率高于阳性细胞数(+)和(-)病例(P<0.05)。(6)62例GISTs中,nm23均有不同程度的阳性表达,与肿瘤分级呈负相关性(P<0.01)。nm23阳性细胞数(+)的病例PD发生率明显高于其余两组(P<0.01)。(7)E2F1蛋白在GISTs中的阳性率为71.0%,危险度分级与E2F1表达强度之间有显著相关性(P<0.05)。E2F1(+++)的病例中PD发生率与其它组间有差异(P均<0.01)。(8)Ki-67在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级GISTs病例中的增殖指数分别为0.0%、16.7%、36.8%、94.4%,Ki-67阳性细胞数与肿瘤恶性度有关,相关性分析,二者有显著性意义(P<0.05)。研究结论:1.GISTs染色体存在着非随机的DNA拷贝数扩增或缺失的位点,提示这些位点可能含有候选的致癌基因和抑癌基因。14q和22q的缺失是GISTs发生的早期事件,具有1p缺失的GISTs患者可能预后较差,9p的缺失和17q、20q扩增可能是GISTs恶性进展的标志,8q和5p扩增的预后意义有待考证。2.p16阳性细胞数大于50%,Ki-67增殖指数可能是GISTs有价值的预后参考指标;nm23、Cmyc可以作为预测GISTs侵袭行为的指标;E2F1可能是GISTs的一个不良预后因子,但还需结合其他的分子生物学指标及更多样本例数来综合评估;MDM2敏感性较差,不适合作为GISTs预后的常规标记物;PTEN、p53能否作为GISTs的预后标记物,还有待考证。本研究的创新点:1.本研究从胃肠道间质瘤(GISTs)的遗传学变化和预后因素两方面研究,涉及整个基因组染色体的相关基因改变。2.根据GISTs特异的基因改变,结合国内外研究现状,针对性的选取分子生物学指标,对其表达情况及与GISTs预后的关系进行探讨,完善预后评价标准。