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现代畜牧生产中,大量抗生素滥用、超标使用导致的细菌耐药性通过生态环境和食品给人类的健康安全带来了极大的隐患。本研究选择了浙江省内的规模养猪场、肉品屠宰加工厂及相应的肉品销售农贸市场,对细菌耐药性及耐药基因进行调查研究,从而揭示猪肉规模化生产中的细菌耐药表型、基因型状况以及分子流行病学的规律,为生猪养殖合理用药、控制细菌耐药性发展提供依据,从源头上控制肉制品安全,保证生态环境不被污染及人类的健康安全。 主要实验结果如下: 1.猪肉生产链的细菌污染状况。以浙江省养殖场、屠宰加工厂、农贸市场的猪肉、设备、环境样品为对象,分离鉴定大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌,并对应PCR鉴定的结果,建立快速检测的PCR体系,研究猪肉生产链中细菌污染状况。结果表明:4种细菌的特异基因全部扩增出来,设计的引物具有特异性,只能专一性扩增出对应条带。PCR检测生化鉴定呈阳性的菌株的检出率达到90%以上,扩增结果准确率高。共分离得到195株大肠杆菌、104株沙门氏菌、81株金黄色葡萄球菌、71株小肠结肠炎耶尔森氏菌。猪肉生产链中三大环节的污染率总体趋势为屠宰加工厂>养殖场>农贸市场。 2.猪肉生产链细菌耐药性分析。本实验检测了从猪肉生产链中分离细菌的耐药性、生产链不同环节细菌耐药性的监测及细菌的多重耐药性。结果表明:生产链中分离的细菌对5类17种常见抗生素均产生了不同程度的耐药性,其中对苯唑西林、四环素、甲氧苄啶等耐药性较高,对丁胺卡那霉素耐药性最低。养殖场、屠宰加工厂中细菌耐药严重,农贸市场相对较好。其中,β-内酰胺类抗生素普遍耐药率较高,四环素类、磺胺类次之,喹诺酮类抗生素比较敏感,适宜临床使用。分离细菌的多重耐药情况较为严重,大部分具有5-9重耐药性。 3.猪肉生产链耐药基因及其传递性研究。本实验检测了猪肉生产链中分离细菌对常用抗生素的耐药基因,研究了环境分离株的耐药基因检出率、生产链不同环节耐药基因的监测以及细菌耐药株的传递趋势。实验所用的9种耐药基因均有检出,blaTEM、 aac6-Ⅰb、tetB、tetC的检出率较高,这与细菌药敏试验的结果基本一致。猪肉生产链中,耐药基因检出率屠宰加工厂>养殖场>农贸市场。另外,生猪体表、胴体、猪肉表面的耐药基因检出率最高,说明细菌的耐药性可能具有传递性,为进一步研究耐药株的传递提供了基础。