弥漫性轴索损伤后大鼠海马CRMP2和p-CRMP2表达变化的实验研究

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目的通过免疫荧光、Western Blot,实时定量PCR等方法,研究大鼠弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury, DAI)后海马CRMP2和P-CRMP2的表达变化。方法1.使用自主设计研制的可同时产生瞬时角加速和线加速运动的致伤装置(专利号:ZL200920067463.4)建立DAI大鼠模型。2.利用免疫荧光技术,定性研究正常对照组和DAI后7天组大鼠海马内CRMP2和P-CRMP2的表达。3.利用Western Blot技术,定量研究正常对照组和DAI后不同时间点大鼠海马内CRMP2和P-CRMP2的表达变化。同时利用实时定量PCR技术,检测上述各组CRMP2的mRNA表达变化。结果1.免疫荧光:CRMP2和P-CRMP2在大鼠海马组织神经元中广泛表达。实验观察发现,正常组和DAI后7天组海马神经元中CRMP2和P-CRMP2免疫荧光反应阳性,发出绿色荧光,胞核发出蓝色荧光。2. Western Blot和实时定量PCR:CRMP2和P-CRMP2在DAI后不同时间点的海马组织中均有表达。蛋白水平上:CRMP2在伤后3天、7天的表达较正常对照组明显降低(p<0.05),但是伤后30天组较正常对照组无明显差异。mRNA水平上:CRMP2的mRNA在伤后3天、7天的表达较正常对照组明显降低(p<0.05),但是伤后30天组较正常对照组无明显差异。蛋白水平上:P-CRMP2在伤后1天、3天、7天的表达较正常对照组明显增高(p<0.05),但是伤后30天组较正常对照组无明显差异。结论DAI前后大鼠海马内均有CRMP2和P-CRMP2表达。DAI后早期CRMP2表达减少,P-CRMP2表达增多,30天左右均恢复至正常水平。
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