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目的:研究雌激素(E2)经何种受体-雌激素受体α(Erα)和/或雌激素受体β(Erβ)-保护中脑黑质致密部(pars compacta of substantia nigra,SNc)的多巴胺(dopamine,DA)能神经细胞,并探讨PI3-K/Akt信号通路介导其作用的可能性。
方法:本研究以体外培养的新生1～3天的SD大鼠中脑黑质脑片为研究对象,培养7天后采用免疫荧光双标染色观察DA能神经细胞中Erα、Erβ的表达情况;在此基础上,再将培养的脑片分组:正常对照组和6-羟多巴胺(6-OHDA)组(200μmol/L),6-OHDA组又分为:E2组、Wortmannin(PI3-K特异性阻断剂)+E2组、雌激素受体α激动剂(PPT)组、Wortmannin+PPT组、雌激素受体β激动剂(DPN)组、Wortmannin+DPN组,6-OHDA作用于脑片1小时后加入Wortmannin,再1小时后分别加入E2、PPT、DPN,15min后收集脑片,western blot方法检测酪氨酸羟化酶(TH)、p-Akt、Bcl-2、Bad、procaspase-3在黑质的表达情况。
结果:中脑脑片培养至第7天时,可见脑片边缘的细胞清晰,细胞边缘有长的突起爬出,贴壁良好。免疫荧光染色结果显示脑片SNc中有TH+细胞。免疫荧光双标染色结果显示SNc中所有TH+细胞均表达有Erα、Erβ,TH+/Erα+、Erβ+均为胞浆着色。Western blot方法检测TH、p-Akt、Bcl-2、procaspase-3的表达在E2、PPT及DPN组与对照组相比显著升高,而Bad的表达显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05);同时观察到PPT组较DPN组作用显著,差异有统计学意义(P＜0.05);阻断剂组与相应的未加阻断剂组相比,TH、Bcl-2、(P＜0.05)。
结论:在本实验条件下,雌激素、PPT及DPN对多巴胺能神经细胞均有保护作用,PPT的保护作用较DPN显著,即Erα在保护多巴胺能神经细胞中发挥主要作用。这种保护作用与激活PI3-K/Akt信号通路有关,其机制可能是通过调节其下游的Bcl-2、Bad及procaspase-3的表达而实现的。