【摘 要】
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该文就该室谢秀杰、朱晔荣构建的诱导型表达抗冻肽八联体基因及组成型表达抗冻肽四联体基因用农杆菌介导法转基因烟草,并对筛选到的卡那霉素抗性植株分别进行不同的检测.对前
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该文就该室谢秀杰、朱晔荣构建的诱导型表达抗冻肽八联体基因及组成型表达抗冻肽四联体基因用农杆菌介导法转基因烟草,并对筛选到的卡那霉素抗性植株分别进行不同的检测.对前者,因为谢秀杰构建的诱导型表达的抗冻肽八联体基因是与GUS报告基因融合表达的,所以作者主要是对GUS报告基因进行了活性检测.通过荧光光度分析法检测,得到转基因植株的GUS表达活性明显高于对照植株;通过组织化学法检测,观察到GUS融合基因在转基因植株茎横切面维管束附近细胞间隙分泌表达,在叶片的徒手切片细胞组织中也有表达,出现许多蓝色斑点.所以可以认为与GUS基因融合表达的抗冻肽基因同样在转基因植株中表达,而且是组织特异性分泌表达.对后者,转组成型表达抗冻肽四联体基因的烟草植株,作者进行了Southern blot分析,基本上检测到外源基因已整合到烟草基因组DNA中,还可以对转基因植株做进一步的检测.根据近几年冷诱导基因及其表达调控元件的研究成果,该文设计合成了冷诱导基因表达调控元件C-repeat/DRE及其转录激活因子CBF1的基因序列,并利用合成的冷诱导调节元件、及该室朱晔荣构建的抗冻肽四联体基因,构建了顺式及反式冷诱导调节元控制下的抗冻肽基因植物表达载体,通过酶切电泳检测证明构建成功.
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