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目的:观察利多卡因、丁卡因、透明质酸酶和肾上腺素对体外培养的兔晶状体上皮细胞(RLECs)的影响,为后囊膜混浊(PCO)的预防和治疗提供一种可临床应用的有效药物。
方法:采用组织块培养法培养RLECs,分别用利多卡因、丁卡因、透明质酸酶和肾上腺素这4种药物的不同浓度对细胞进行干预,用DMEM培养液作为阴性对照,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测药物对RLECs的影响,分别以光镜和电镜观察细胞形态。
结果:
1.体外培养的正常兔晶状体上皮细胞:体外培养的正常兔晶状体上皮细胞呈单层贴壁状,由中央区域向周边呈铺砌型生长,中央区的细胞呈六边形,大小一致,周边区的细胞体积较大,形态不规则,且排列稀疏。HE染色观察正常兔晶状体上皮细胞单层贴壁生长,细胞呈多角形,边界清楚,胞浆呈均匀的粉红色,胞核椭圆形,呈蓝紫色,胞体与胞体之间叠加联接。
2.药物对体外培养的兔晶状体上皮细胞的影响
(1)D细胞活性的检测:用利多卡因、丁卡因、透明质酸酶和肾上腺素这4种药物的不同浓度对细胞作用24小时后,除O.1u/ml透明质酸酶组和105mg/ml肾上腺素组外,其余各组吸光度值均低于正常对照组,与正常对照组相比差异有统计学意义;用利多卡因、丁卡因、透明质酸酶和肾上腺素这4种药物的不同浓度对细胞作用72小时后,各组吸光度值均低于正常对照组,与正常对照组相比差异有统计学意义。说明利多卡因、丁卡因、透明质酸酶和肾上腺素对RLECs的增殖均具有抑制作用,且其抑制作用具有浓度和时间依赖性,在浓度不变时其抑制作用随时间的延长而增强,相同时间内随药物浓度的增高抑制作用增强。
(2)药物作用后细胞形态学观察:
①倒置显微镜观察:在加药10分钟时,O.5%利多卡因组和0.375%丁卡因组即有许多细胞从培养瓶底部脱落,200u/ml透明质酸酶组和O.1mg/ml肾上腺素组无明显变化;在加药0.5小时时O.5%利多卡因组和0.375%丁卡因组细胞从培养瓶底部脱落数与lO分钟时相比明显增多,200u/ml透明质酸酶组和O.1mg/ml肾上腺素组仅少量细胞从培养瓶底部脱落;24小时时O.5%利多卡因组和0.375%丁卡因组大部分细胞从培养瓶底部脱落,剩余细胞在显微镜下观察细胞呈部分脱落,其余两组也有大量细胞从培养瓶底部脱落。说明这4种药物均可以松解细胞间及细胞与培养瓶底部间的连接,且其作用随时间的延长而加强,其中利多卡因和丁卡因作用较透明质酸酶和肾上腺素更显著。
②光镜观察:HE染色观察:O.5%利多卡因组和0.375%丁卡因组细胞形状不规则,呈部分脱落,其中0.375%丁卡因组可见细胞坏死;200u/ml透明质酸酶组及O.1mg/ml肾上腺素组细胞尚呈多边形,核碎裂,胞浆内出现空泡。上述结果说明4种药物均可以破坏细胞结构,引起细胞损伤。
③电镜观察:O.5%利多卡因组细胞核形状尚规则,染色质结块,胞浆内线粒体肿胀,内嵴消失,粗面内质网液泡化;0.375%丁卡因组可见细胞膜及核膜破裂,染色质边集,线粒体肿胀,内嵴消失;200u/ml透明质酸酶组细胞核形状不规则,染色质结块,线粒体肿胀,内嵴消失;O.1mg/ml肾上腺素组均可见细胞核形状不规则,浓缩偏位。上述结果说明这4种药物对细胞破坏严重,足以引起细胞细胞死亡。
结论:
1.利多卡因、丁卡因、透明质酸酶和肾上腺素对体外培养的兔晶状体上皮细胞增殖的均具有抑制作用,且其抑制作用具有浓度和时间依赖性,在浓度不变时其抑制作用随时间的延长而增强,相同时间内随药物浓度的增高抑制作用增强。
2.利多卡因、丁卡因、透明质酸酶和肾上腺素均可以松解体外培养的兔晶状体上皮细胞间及细胞与培养瓶底部间的连接,使细胞从培养瓶底部脱落呈悬浮状态,且其作用随时间的延长而加强,其中利多卡因和丁卡因作用较透明质酸酶和肾上腺素更显著。
3.利多卡因、丁卡因、透明质酸酶和肾上腺素均可以破坏体外培养的兔晶状体上皮细胞,引起细胞死亡。