论文部分内容阅读
目的：(1)观察SD(Sprague-Dawley)大鼠在不同致伤势能的Allen’s模型和脊髓全切模型的微环境中不同时间点的髓鞘相关抑制因子的表达。(2)探讨SD大鼠脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)后的脊髓提取液模拟髓鞘相关抑制因子对轴突生长抑制微环境的最佳时间点。方法：(1)选择125只成年雌性健康SD大鼠,随机分为A组(假手术组,25只)；B组(20g×5cm,25只)；C组(20g×10cm,25只)；D组(20g×15cm,25只)；E组(脊髓全切组,25只)。(2)在制模成功后第1d、5d、7d、14d、28dBBB后肢运动功能评分、MEP电生理监测、病理切片鉴定、观察各组大鼠脊髓损伤程度；Western Blot印迹分析、RT-PCR检测髓鞘相关抑制因子(Nogo-A、MAG、OMgp)的表达。(3)本次实验数据的计量资料均用x±s表示,采用SPSS19.0软件包处理,各个组间比较使用方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果：(1)整个实验中SD大鼠死亡24只,其中B组2只,死亡率为8.33%；C组死亡4只,死亡率为16.67%；D组8只,其中尿路感染死亡2只,术后出现血尿1只,死亡率为33.33%；E组,死亡10只,其中尿路感染死亡4只,出现血尿3只,死亡率为41.67%,E组的死亡率和并发症最高。(2)造模后,每个组的BBB评分均降低,A组SD大鼠仅表现为行走轻度障碍和肢体协调性欠佳,第5天后恢复正常；D、E两组大鼠损伤后双后肢全瘫,所有手术组SD大鼠均随着时间延长BBB评分逐渐增高。1d,5d,7d,14d,28d各组BBB评分,A组：19.89±0.57分,20.51±0.49分,21分,21分,21分；B组：2.94±0.57分,5.88±0.84分,8.46±0.76分,14.12±0.35分,15.34±0.76分；C组：1.72±2.12分,4.28±1.46分,6.02±1.38分,10.33±1.40分,11.28±3.42分；D组：0.00±0.00分,0.84±0.75分,1.25±0.78分,3.50±1.51分,4.31±2.32分；E组：0.00±0.00分,0.89±0.39分,1.35±0.97分,2.45±0.75分,4.42±1.93分。B组、C、组、D组、E组与假手术A组在对应时间点之间比较,差异有统计学意义(P<0.05),D组和E组在对应时间点之间比较差异无统计学差异(P>0.05)。(3)组织学检查：A组早期出现神经元水肿,其它时间点细胞数量无异常改变。B、C、D、E组在伤后24小时病灶处出现炎性细胞浸润,神经元细胞肿胀明显,随着时间推移,神经细胞减少；伤后28天发现大量星形胶质细胞增生,瘢痕及脊髓空洞形成,D、E组明显重于B、C组。(4)伤后各组的Id、5d、7d、14d、28d MEP潜伏期,A组：2.24±0.15ms,2.28±0.14ms, 2.35±0.07ms,2.33±0.12ms,2.41±0.04ms;B组：3.83±0.16ms,3.51±0.15ms, 2.33±0.14ms,2.28±0.16ms,2.50±0.12ms;C组：4.32±0.11ms,4.13±0.29ms, 3.63±0.28ms,3.49±0.17ms,3.35±0.05ms;D组：4.74±0.22ms,4.44±0.06ms, 4.48±0.25ms,4.61±0.11ms,4.72±0.51ms;E组：4.75±0.32ms,4.41±0.07ms, 4.53±0.01ms,4.71±0.09 ms,4.69±0.34 ms。B组、C、组、D组、E组与假手术A组在对应时间点间比较,p<0.05；各组内后一时间点与其前一相邻时间点比较,p<0.05； D组和E组在对应时间点之间比较差异无统计学意义(p>0.05)。(5)Western blot检测,Id、5d、7d、14d、28d MAG相对量表达,A组：0.324±0.084,0.334±0.054,0.413±0.032,0.389±0.032,0.404±0.043;B组：0.413±0.092,0.494±0.132,0.599±0.134,0.494±0.133,0.396±0.098；C组：0.436±0.123,0.496±0.136,0.602±0.145,0.598±0.034,0.401±0.143;D组：0.514±0.137,0.594±0.184,0.798±0.139,0.710±0.032,0.405±0.039；E组：0.503±0.157,0.589±0.096,0.801±0.147,0.765±0.098,0.423±0.119。1d、5d、7d、14d、28d Nogo-A相对量表达,A组：0.334±0.076,0.367±0.045,0.423±0.031,0.387±0.041,0.463±0.037。B组：0.401±0.184,0.501±0.134,0.593±0.118,0.398±0.123,0.384±0.124；C组：0.424±0.163,0.474±0.125,0.674±0.136,0.584±0.032,0.414±0.025；D组：0.513±0.141,0.574±0.164,0.794±0.129,0.714±0.105,0.494±0.098;E组：0.515±0.098,0.585±0.174,0.807±0.105,0.736±0.038,0.485±0.032。1d、5d、7d、14d、28d OMgp相对量表达, A组：0.303±0.084,0.312±0.105,0.323±0.132,0.337±0.021,0.298±0.134。B组：0.473±0.132,0.678±0.142,0.584±0.104,0.403±0.098,0.394±0.132;C组：0.485±0.174,0.732±0.103,0.641±0.098,0.492±0.132,0.401±0.132；D组：0.532±0.134,0.814±0.093,0,703±0.032,0.501±0.134,0.432±0.125;E组：0.541±0.133,0.796±0.113,0.705±0.141,0.534±0.132,0.395±0.023。检测结果显示B、C、D、E组脊髓损伤后1天即可见Nogo-A、MAG、OMgp的表达,Nogo-A的表达强度在脊髓损伤后第5d开始上升,呈递增趋势,第7d表达最高,14d后逐步降低,第28天逐渐恢复到假手术组水平,以D、E两组表达最高；MAG在7d后达到高峰,到28d后逐渐恢复到假手术组水平。OMgp脊髓损伤后1天即可见到髓鞘中OMgP的表达,第5天达到高峰,第28d后逐渐恢复至假手术组水平。(6)RT-PCR检测：Nogo-A mRNA在1d、5d、7d、14d、28d相对量表达,A组：1.0054±0.0042,1.0049±0.0038,1.0019±0.0040,1.0023±0.0037,1.0040±0.0028。B组：0.8600±0.0034,1.2557±0.0029,1.3097±0.0042,1.2708±0.0028,0.8693±0.0018；C组：0.8958±0.0013,1.3177±0.0016,1.4817±0.0021,1.3351±0.0019,0.8961±0.0011；D组：0.9451±0.0010,1.4253±0.0012,1.5452±0.0023,1.3933±0.0019,0.9394±0.0023；E组：1.0567±0.0021,1.5925±0.0023,1.7734±0.0017,1.6650±0.0025,1.0063±0.0026。MAG mRNA在1d、5d、7d、14d、28d相对量表达为,A组：1.0045±0.0015,1.0001±0.0017,1.0047±0.0021,1.0017±0.0023,1.0019±0.0024。B组：0.9651±0.0019,1.0455±0.0023,1.0903±0.0018,1.0143±0.0026,0.9986±0.0025。C组：1.0233±0.0017,1.1732±0.0019,1.2075±0.0018.1.1843±0.0023,1.0360±0.0027。D组：1.0537±0.0019,1.2395±0.0025,1.4250±0.0028,1.243±0.0019,1.0744±0.0026。E组：1.0780±0.0016,1.3170±0.0024,1.5045±0.0028,1.3239±0.0029,1.1280±0.0034。OmgPmRNA在1d、5d、7d、14d、28d相对量表达为,A组：0.5001±0.0018,0.5093±0.0021,0.5016±0.0020,0.5012±0.0018,0.5013±0.0017。B组：0.5335±0.0021,0.5653±0.0018,0.5638±0.0021,0.5400±0.0023,0.5324±0.0024；C组：0.5919±0.0018,0.7059±0.0021,0.6425±0.0020,0.6104±0.0029,0.5882±0.0028;D组：0.6488±0.0018,0.8545±0.0030,0.8085±0.0019,0.6705±0.0034,0.6340±0.0019；E组：0.6787±0.0015,0.9030±0.0021,0.8675±0.0026,0.7269±0.0023,0.6661±0.0024。手术组B、C、D、E组Nogo-A、MAG在第5天的相对表达量与本组其他时间点比较,差异有统计学意义(P<0.05),D组与E组同一时间点的相对表达量比较无差异(P>0.05)。OMgp在第7天的相对表达量与本组其他时间点比较,差异有统计学意义(P<0.05),D组与E组同一时间点的相对表达量比较无差异(P>0.05)。Nogo-A、MAG、OMgp在SCI后的病灶中心明显上调,第1天可检测到表达,Nogo-A和MAG在第7天达到峰值,OMgp在第5天后达到高峰,28天后逐渐恢复到假手术组水平,以D组、E组两组表达最高。结论：(1)致伤势能为20gx5cm,20g×10cm,20gxl5cm,可模拟SD大鼠轻、中、重度脊髓损伤模型的微环境；不同势能的改良Allen’s模型较脊髓全切模型的死亡率和并发症低,更适合基础实验研究。(2)Nogo-A、MAG、OMgp在不同致伤势能的Allen’s模型和脊髓全切模型中均有表达,损伤势能越大,表达越高,且脊髓全切模型组(E组)与脊髓重度损伤组(D组)的表达无差异。脊髓损伤后5-7天的脊髓提取液可以模拟髓鞘相关抑制因子对轴突生长抑制的微环境。