论文部分内容阅读
研究背景 胃癌死亡率居我国肿瘤死亡率首位,其复发和转移是手术、辅助治疗等方法失败的主要原因。抗血管生成被认为是一种能有效抑制肿瘤生长和转移的新疗法,因此许多国家都在研究抑制肿瘤血管生成的药物。我们在以前动物实验中发现,从活血化瘀药川芎中提取的有效成分——川芎嗪(Tetraethylpyrazine,TMP),能使胃癌组织的微血管计数(MVC)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)表达减少。为了解该药抑制胃癌血管生成的机制,我们在上述动物实验的基础上进行体外细胞实验中对此进行研究。 研究目的 1.研究川芎嗪对无促血管生长因子正常培养条件下人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cell,HUVEC)增殖的影响 2.研究川芎嗪对胃腺癌细胞培养上清诱导的HUVEC增殖的影响。 3.研究川芎嗪对胃腺癌细胞分泌VEGF和bFGF的影响。 4.研究川芎嗪对受抑制因子mRNA表达水平的影响。研究方法 1.实验一:采用改进的Jaffe法从脐带分离培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)并用第八因子相关抗原免疫荧光法鉴定。 2.实验二:将在96孔板培养24小时的HUVEC分为正常对照组(加入SFM完全培养基)和5个川芎嗪组(依次加入含川芎嗪浓度为1、5、25、125、625μg/ml的SFM完全培养基),用噻唑蓝(MTT)比色试验法检测第24、48、72小时的细胞增殖情况。 3.实验三:包括三个步骤。 步骤1:收集SGC-7901胃腺癌细胞株的48小时培养上清冻存于-20℃备用; 步骤2:取出内皮细胞加入药物处理前,先制备不含药的条件培养基和含药条件培养基(将步骤1中的收集的培养上清按1:1的比例与SFM完全培养基混合后,制成条件培养基;而将该肿瘤上清与含川芎嗪的SFM完全培养基按1:1的比例混合后,分别配制成终浓度为1、5、25、125、625μg/ml制成含药条件培养基); 步骤3:将培养24小时的血管内皮细胞分为正常对照组(加入SFM完全培养基)、条件对照组(仅加入不含药的条件培养基)和5个川芎嗪组(将含不同浓度川芎嗪的含药条件培养基依次加入各组),用噻唑蓝(MTT)比色试验法检测第24、48、72小时内皮细胞增殖情况。 4.实验四:将SGC-7901胃腺癌细胞培养于6孔板,培养24小时后每板细胞分为