【摘 要】
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研究背景:食管胃结合部腺癌（Adenocarcinoma of esophagogastric junction,AEG）是一种特殊类型的消化道恶性肿瘤。近几十年来,AEG的发病率持续升高,得到了越来越多的临床关注。胃食管反流、吸烟、肥胖等可能是AEG高发病率的重要诱因。多数有临床症状的患者在确诊时已处于癌症中晚期,预后极差。随着科技的进步,近年来外科手术和放化疗等治疗方式已取得很大进展,但AEG
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研究背景:食管胃结合部腺癌（Adenocarcinoma of esophagogastric junction,AEG）是一种特殊类型的消化道恶性肿瘤。近几十年来,AEG的发病率持续升高,得到了越来越多的临床关注。胃食管反流、吸烟、肥胖等可能是AEG高发病率的重要诱因。多数有临床症状的患者在确诊时已处于癌症中晚期,预后极差。随着科技的进步,近年来外科手术和放化疗等治疗方式已取得很大进展,但AEG患者的5年生存率仍旧很低。AEG的发病机制尚未明确。基因 HN1L（Hematological and neurological expressed 1 like）,也被称为 L11,定位于人类染色体16p13.3。多项研究证明,HN1L在非小细胞肺癌细胞、肝癌、乳腺癌等恶性肿瘤中表达水平增高,并可能通过不同的信号通路促进肿瘤的恶性增殖、转移。但目前HN1L与AEG的关系仍是未解之谜。本研究以38例AEG患者组织和AEG细胞系为研究对象,检测了 HN1L在AEG组织中的表达情况,探究了 HN1L对AEG相关细胞系增殖、迁移、侵袭和凋亡的作用,为进一步研究其分子机制提供理论支持。方法:1.免疫组织化学染色检测38例AEG患者的癌及癌旁组织中HN1L的表达水平。2.统计38例患者的临床病理特征,分析各临床病理特征与HN1L的表达水平的关系。3.实时荧光定量PCR（qRT-PCR）筛选有效的实验细胞株,构建敲低HN1L的AEG细胞系。敲低HN1L干扰慢病毒及对照慢病毒由上海吉凯公司构建和包装,分别转染至AGS和HGC-27细胞系。4.通过Celigo仪实时监测技术、克隆形成实验和MTT实验检测敲低HN1L对AEG细胞增殖的影响。5.通过transwell实验检测敲低HN1L对AEG细胞迁移和侵袭的影响。6.通过流式细胞术检测敲低HN1L对AEG细胞凋亡的影响。结果:1.HN1L在AEG癌组织中表达水平高于癌旁组织。HN1L在AEG癌组织（n=38）和对应癌旁组织（n=38）中的表达差异有统计学意义（P＜0.001）。2.HN1L高表达组（评分≥3.4）和HN1L低表达组（评分＜3.4）在患者的性别、年龄、肿瘤长度、Siewert分型等方面无统计学意义（P＞0.05）。HN1L的表达水平与AEG患者TNM分期（p=0.013）和有无淋巴结转移（p=0.03）显著相关。3.QRT-PCR检测发现,与MKN-45、MGC80-3细胞系比较,AGS和HGC-27细胞系中HN1L的表达水平较高。因此,选择AGS和HGC-27细胞系作为实验对象。成功构建稳定敲低HN1L的AGS和HGC-27细胞系。4.敲低HN1L能在体外抑制AEG细胞的增殖。Celigo仪连续检测的细胞生长曲线显示,敲低HN1L后,AEG细胞的增殖速率明显降低（P＜0.05）;克隆形成实验显示,敲低HN1L后,AEG细胞克隆数量显著减少（P＜0.05）;MTT实验显示,敲低HN1L后,AEG细胞的增殖能力明显下降（P＜0.05）。5.敲低HN1L能抑制AEG细胞的迁移和侵袭。Transwell迁移实验表明,敲低HN1L后,AEG细胞的穿聚碳酸酯膜细胞数明显减少（P＜0.05）。Transwell侵袭实验表明,敲低HN1L后,AEG细胞的穿聚碳酸酯膜细胞数明显减少（P＜0.05）。6.敲低HN1L能促进AEG细胞的凋亡。流式细胞术检测结果显示,敲低HN1L后,AEG细胞的凋亡速率明显升高（P＜0.05）。结论:1.HN1L在AEG癌组织中表达水平高于癌旁组织。2.HN1L的表达与AEG患者的TNM分期和有无淋巴结转移显著相关。3.敲低HN1L可以抑制AEG细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进AEG细胞的凋亡。本研究表明,HN1L可能是AEG的促癌基因并有希望成为AEG诊疗的新靶标。
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