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一、研究目的及意义结肠癌是目前常见的消化道恶性肿瘤之一,随着生活水平提高和生活习惯的改变,近年来结肠癌的发病率呈现出明显的上升趋势。目前治疗结肠癌晚期仍然是坚持以放、化疗为主。但在治疗过程当中,药物副作用极大,病人生活质量很低。目前临床应用药物当中,比较成功的化疗药物是肿瘤细胞有丝分裂期抑制剂紫杉醇等。Tao等经过大量研究发现,肿瘤凋亡可能是与M期阻滞(M-arrest)和M期滑移(M-slippage)机制相关。该研究显示,当把细胞用药物阻滞在M期后,加入另外一种药物可以促进肿瘤细胞凋亡。中医中药对于肿瘤,尤其是晚期肿瘤的治疗效果显著,可以明显改善肿瘤患者的生存质量和降低放、化疗药物的副反应。大量研究表明,中药的某些有效成分可以有效抑制肿瘤细胞的增殖,促进其凋亡。吴茱萸碱是迄今报道的具有抗肿瘤生长、直接诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤组织的侵袭和转移的有效成分之一。本课题组前期工作也证实吴茱萸碱可以在G2/M期诱导肿瘤细胞的凋亡,这与M期阻滞(M-arrest)和M期滑移(M-slippage)的肿瘤凋亡机制相吻合。本实验第一部分研究吴茱萸碱联合CDK1抑制剂R0-3306或靛玉红对鼠结肠癌CT26细胞的协同杀伤作用,在M期阻滞(M-arrest)和的肿瘤凋亡机制基础之上,探讨发生M期阻滞(M-arrest)和M期滑移(M-slippage)的时间点以及序贯用药是否会对M期滑移(M-slippage)起到促进作用,以药效反应来反证吴茱萸碱联合CDKl抑制剂对鼠或人结肠癌的协同杀伤作用与M期阻滞(M-arrest)和M期滑移(M-slippage)的肿瘤凋亡机制相吻合。并以相同的实验条件和实验方法试探性验证紫杉醇诱导M-arrest之后,加入CDK1抑制剂,旨在阐明紫杉醇诱导肿瘤凋亡机制是否与M期阻滞(M-arrest)和M期滑移(M-slippage)的肿瘤凋亡机制相关。为中西药联合应用抗肿瘤做基础性研究。二、研究方法：2.1.1采用流式细胞术检测吴茱萸碱诱导CT26细胞周期阻滞出现的时间点：分别设立同步化后18小时对照组、18小时EVO 2mg/L组、同步化后21小时对照组、21小时EVO 2mg/L组、同步化后24小时对照组、24小时EVO 2mg/L组、同步化后27小时对照组、27小时EVO 2mg/L组、同步化后30小时对照组、30小时EVO 2mg/L组,作用之后收取细胞,固定后PI单染,进行流式细胞仪检测。2.1.2 Westernblot检测吴茱萸碱对CT26细胞周期蛋白表达地影响：如上分组,收集蛋白,检测各组中β-actin、Bax、CyclinE、CyclinBl的表达情况。检测。2.1.10 Westernblot方法检测紫杉醇联合靛玉红对鼠结肠癌CT26细胞的周期和凋亡率的影响。如上分组,收集蛋白,检测各组中β-actin、Bax、CyclinE、 CyclinBl的表达情况三、结论(1)吴茱萸碱诱导结肠癌细胞CT26发生凋亡的机制符合M-arrest和M-slippage的凋亡机制。但当加入CDK1抑制剂R03306之后,药物的高浓度组和低浓度组出现矛盾的结果,这可能需要进一步做撤药释放实验,看药物处理后的细胞最终的去向是走向正常还是凋亡。药物高低浓度出现相反结果和单独使用EVO时异倍体的出现,也可能反应,CT26细胞的M期之前SAC检验点的敏感性差有关,这也是本实验进一步探索的一个方向。(2)紫杉醇与CDK1抑制剂RO-3306序贯或联合应用并没有表现出协同作用,而是表现出拮抗。这对于临床用药有重大参考意义,即临床应用紫杉醇与CDKI抑制剂在治疗肿瘤时应当慎重!(3)吴茱萸碱联合靛玉红序贯或联合用药能够起到协同杀伤肿瘤细胞的作用,这将为临床用药提供依据。(4)紫杉醇与靛玉红联合或者序贯用药作用于结肠癌细胞CT26虽然在流式检测和western结果显示协同或者相加的药效。但从具体数据来看,临床联合应用的实质意义不大。