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随着对脑缺血机制研究和认识的不断深入，发现单纯阻断造成缺血性脑损伤的某一个环节并不能产生明显的神经保护作用，溶栓仍是目前临床治疗急性脑卒中的主要手段，但溶栓后的再灌注往往会加剧脑损伤，因此研究和开发能有效的对抗再灌注性脑损伤的药物显得尤其重要。 双苯氟嗪（dipfluzine，Dip）是我校药学院研制开发的二苯哌嗪类钙通道阻滞剂，全脑缺血模型研究表明双苯氟嗪可以选择性扩张脑血管、缓解缺血脑区的脑血流减少、减轻脑水肿、抑制脑缺血引起的脑内兴奋性氨基酸含量升高，显示了良好的脑保护作用。本研究拟采用endothelin-1（ET-1）诱导的大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，通过对脑血流、细胞凋亡、胞浆钙浓度、自由基损伤和脑透析液中兴奋性和抑制性氨基酸含量变化的检测，进一步评价双苯氟嗪在脑缺血再灌注损伤中的保护作用及其机制。第一部分 Endothelin-1诱导的大鼠局灶性脑缺血再灌注模型目的：研究ET-1诱导的大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，确定适合进行缺血再灌注损伤机制研究和抗缺血性脑损伤神经保护剂筛选的最适ET-1浓度。 方法：40只雄性Wistar大鼠，随机分为假手术组，ET-1 300pmol组，ET-1 360pmol组，ET-1 400pmol组和ET-1 500pmol组。将4?l不同浓度的ET-1分别以1?l·min-1的速度经导管灌注到一侧大脑中动脉（MCA）附近，通过ET-1强烈的缩血管作用造成局灶性脑缺血再灌注模型。假手术组行手术通路，将等体积的人工脑脊液(aCSF)灌注到大脑中动脉附近，采用氢清除法监测灌注ET-1前后大鼠灌注侧纹状体脑血流（CBF）的变化，尾动脉插管术检测灌注ET-1对大鼠血压的影响，并于灌注ET-1后6h进行神经功能评分，采用TTC染色法观察灌注不同浓度ET-1后24小时脑梗塞体积的变化。结果：ET-1可使纹状体血流呈现浓度依赖性的降低，于灌注ET-1后<WP=5>10min时纹状体CBF降至最低，分别为：ET-1300 pmol组(27.1±2.9)%、360pmol组(12.7±2.1)%、400pmol组(11.9±1.8)%、500pmol组(9.5±1.6)%；神经功能评分显示假手术组大鼠未表现出神经功能损伤，而各浓度ET-1可造成大鼠不同程度的神经功能损伤，依次为300pmol组2.8±0.5分，360 pmol组6.1±0.6分，400pmol组6.9±0.4分，500pmol组9.3±0.5分，显著低于假手术组（P<0.01）；灌注ET-1后24h，脑梗塞体积百分率随ET-1浓度的增加而呈上升趋势，并显示出良好的浓度依赖关系：300pmol组(3.9±0.3)%、360pmol组(7.4±0.5)%、400pmol组(11.3±1.3)%、500pmol组(16.2±1.8)%；r = 0.9926 ( P<0.05 )；灌注ET-1对大鼠血压无影响。结论：该模型操作简单，造成的脑梗塞范围稳定、重现性好，是一种更接近人类卒中临床状况的较理想的局灶性脑缺血再灌注模型；其中400pmol ET-1所致大鼠局灶性脑缺血再灌注模型更适合于进行脑缺血再灌注损伤机制研究和抗缺血性脑损伤神经保护剂的筛选。第二部分 双苯氟嗪对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及对胞浆Ca2+浓度的影响 目的：评价双苯氟嗪（Dip）和氟桂利嗪(Flu)在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用和对胞浆Ca2+浓度的影响。 方法：大鼠随机分为假手术组，灌注400pmol ET-1后2小时组，4小时组，8小时组，24小时组，溶剂组，Flu20mg·kg-1组，Dip10mg·kg-1组，Dip20mg·kg-1组和Dip40mg·kg-1组。采用ET-1诱导的大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，分别将4μl 400pmol ET-1灌注到大脑中动脉（MCA）附近，分别于灌注ET-1后30 min 和4.5h腹腔注射溶剂、氟桂利嗪和不同剂量的双苯氟嗪，假手术组行手术通路，将等体积的人工脑脊液（aCSF）灌注到大脑中动脉附近。氢清除法监测灌注ET-1前、后纹状体脑血流(CBF)变化，并于灌注ET-1后24h测定脑梗塞体积、血清中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）的含量，双波长荧光分光光度法检测灌注ET-1后不同时间大鼠大脑皮层和纹状体神经细胞胞浆游离Ca2+浓度的变化及双苯氟嗪对胞浆Ca2+浓度变化的影响。 结果：大鼠脑缺血前纹状体平均脑血流量为34.0ml·100g-1脑组<WP=6>织·min-1，溶剂组缺血侧纹状体脑血流明显降低，给予Dip20mg·kg-1和Dip40mg·kg-1明显改善灌注ET-1后70min和100 min缺血侧纹状体脑血流下降（P<0.01），而Flu20mg·kg-1仅于灌注ET-1后100min时可明显改善缺血侧的脑血流（63.1±5.3）%，显著低于同剂量双苯氟嗪改善脑血流的作用（P<0.01）；灌注ET-1后24h，除假手术组外其它各组实验大鼠右侧半脑呈现不同程度的脑梗塞，Dip 10, 20, 40 mg·kg-1 可以剂量依赖性的使脑梗塞体积由溶剂组的(11.1±1.0)%分别降至 (10.6±1.1)%、(7.3±1.1)%和(4.2±0.8)%（r = 0.9797，P<0.01）；同剂量的氟桂利嗪可以产生与双苯氟嗪相似的作用（7.6±0.7）%，灌注ET-1后，溶剂组血清中SOD活性明显低于假手术组，分别为162±31kU·L-1和306±53 kU·L-1，给予双苯氟嗪和氟桂利嗪后血清中SOD活性明显增加，Dip10mg·kg-1：165±40kU·L-1；Dip20mg·kg-1：246±53kU·L-1；Dip40mg·kg-1：269±60kU·L-1；Flu20 mg·kg-1：249±49kU·L-1；双苯氟嗪和氟桂利嗪可以明显对抗脑缺血引起的血清中MDA含量的增加：假手术组9.1±0.5 m