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猪流感(Swine influenza,SI)是由猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)引起的一种急性高度接触传染性的猪呼吸道疾病,临床上以高热、咳嗽、呼吸困难、衰竭、高发病率、低死亡率为特征,该病具有重要的公共卫生意义。
本实验针对流感病毒的M、HA和NA基因设计了5对引物,以便用于H1、H3、N1和N2亚型猪流感病毒的快速鉴定。该RT-PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可以检测到103～104EID50病毒含量。
为了了解广东地区猪流感病毒的流行情况,本实验室收集了2009～2010年广东省各猪场病猪的鼻拭子及肺脏(鼻拭子173份,肺脏231份),经分离鉴定共分离到10株猪流感病毒,其中包括2株古典H1N1猪流感病毒、4株H3N2、1株H9N2、1株H4N8、1株H6N6和1株三源重组HIN2。经过序列分析及进化树分析发现,这些流感病毒多数是从禽流感病毒传播而来的。
两株古典H1N1猪流感病毒分离自2009年六月份广州某猪场,根据序列分析发现,这两株病毒在HA受体结合位点与近年来流行于中国猪群中的H1N1很相似,其中A/swine/Guangdong/L3/09(H1N1)与1931年的猪流感病毒同源性很高,没有发现变异。A/swine/Guangdong/L6/09(H1N1)则与2005年的上海分离株关系较为密切。
A/swine/Guangdong/1/10(H1N2)是一株人-猪-禽三源重组的猪流感病毒,其HA、NP、M和NS基因来源于古典H1N1猪流感病毒;而NA和PB1来源于1968年左右的人H3N2流感病毒;PA和PB2与禽流感病毒处于同一分支。再一次验证了猪做为混合器的作用。
两株新亚型的猪流感病毒A/swine/Guangdong/K4/2010(H4N8)和A/swine/Guangdong/K6/2010(H6N6)完全来源于禽流感病毒。A/swine/Guangdong/K4/2010(H4N8)的8个基因分别来源自韩国、香港以及中国大陆的禽流感重组而成。A/swine/Guangdong/K6/2010(H6N6)与中国汕头的流行于水禽中的H6亚型禽流感病毒的相似性很高。A/swine/Guangdong/L1/10(H9N2)与流行于中国的H9亚型禽流感病毒关系比较近,由三种不同来源的禽流感病毒重组而来。为了对新分离的两株流感病毒有深刻的了解,我们将这两株病毒分别接种六周龄BALB/c小鼠和40d的保育猪,对其病毒的毒力及在动物体内的复制情况进行了解。结果发现该两株病毒在小鼠中复制情况良好,对小鼠不致死,而在猪的体内只能检测到抗体,病毒的复制较差。根据Guan Y的报道,H6亚型禽流感病毒在广东和香港地区水禽中已经流行开来,这样大规模的传播是否会带来新的变异。根据血清学调查发现,在475份猪血清中,H6抗体阳性率为3.4％,这说明H6亚型SIV已经在感染猪群。H6禽流感病毒已经在禽类中大范围传播,并且造成对猪的感染,这是否也会对人类健康造成危害,还有待于进一步考证。我们将还会进行下一轮的实验,包括细胞定位以及雪貂感染实验等,对这两株病毒的生物特性及传播机制进行探讨。