福建漳州水仙病毒病的病原鉴定及两病毒基因组全序列分析

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水仙病毒病是危害水仙生产的主要病害之一。通过对福建漳州水仙的田间病害调查,发现田间发病植株主要表现为褪绿斑驳、褪绿条纹、黄条、花叶等症状。采集的水仙样品经电镜观察,可以观察到长度在550-850nm姗之间的病毒线状粒体。通过血清学方法初步检测到了水仙花叶病毒(Narcissus mosaic virus, NMV)、水仙黄条病毒(Narcissus yellow stripe virus, NYSV)和水仙迟黄病毒(Narcissus late season yellows virus, NLSYV)三种病毒。利用已报道的水仙常见病毒的特异性引物和马铃薯Y病毒属简并引物对水仙样品进行分子生物学检测,并结合生物学方法,确定了漳州水仙病毒病的病原主要包括NMV、NYSV、NLSYV、水仙潜隐病毒(Narcissus latent virus, NLV)、水仙普通潜隐病毒(Narcissus common latent virus, NCLV)和水仙退化病毒(Narcissus degeneration virus, NDV).另外在漳州水仙上还获得了两个马铃薯Y病毒属病毒分离物Y13-1和ZZ-2,其中Y13-1可能为马铃薯Y病毒属的一个新种,ZZ-2可能为NYSV的一个株系。利用基于马铃薯Y病毒属简并引物的RT-PCR和RACE扩增方法,测定了NLSYV漳州分离物(NLSYV-ZZ)和分离物ZZ-2的基因组全序列,并测定了分离物Y13-13’-端约4.6kb的基因序列。NLSYV-ZZ的基因组全序列为该病毒的首次报道(登录号为JQ326210)。基因组全长为9651个核苷酸(nt),5’-非编码区(5’-UTR)长度为123nt,3’-非编码区(3’-UTR)长度为210nt。NLSYV-ZZ基因组全序列与亲缘关系相近的病毒比较, NLSYV-ZZ与NYSV核苷酸序列一致性最高,为69.9%,与薤花叶病毒(Scallion mosaic virus, ScaMV)的一致性为62.5%,与芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus, TuMV)的不同分离物一致性为58.8-59.8%。在基于多聚蛋白构建的系统进化树上,NLSYV-ZZ与NYSV、ScaMV、TuMV、日本山药花叶病毒(Japanese yam mosaic virus、JYMV)聚类在同一个分支上,表明了NLSYV-ZZ与这些病毒亲缘关系较近。分离物Y13-13’-端基因序列长为4606nt(登录号JQ911735)。将3’-端基因序列BLASTn搜索,结果表明Y13-1与NYSV序列一致性最高,其次为ScaMV和TuMV的各个分离物。将Y13-1的CP基因与其他马铃薯Y病毒属病毒比较,发现Y13-1与NLSYV-ZZ、NYSV的序列一致性最高,分别为73.3%nt(73.6%aa)和72.5%nt(77.1%)。这些数值在基因水平上符合ICTV关于马铃薯Y病毒属物种的分类标准。因此本研究初步认定Y13-1可能为新种,并暂时命名为水仙斑驳病毒(Narcissus mottle virus, NMoV)。分离物ZZ-2基因组全长为9654nt,5’-UTR长度为130nt,3’-UTR长度为206nt(登录号JQ911732)。ZZ-2的基因组核苷酸序列与NSYV一致性最高,为71.9%,与NLSYV-ZZ一致性为70.2%。在CP基因上,ZZ-2与NYSV的一致性同样是最高,为77.6%nt(84.4%aa),高于马铃薯Y病毒属病毒分类标准的界限值76%nt(80%aa)。因此本研究认为ZZ-2属于NYSV的一个株系。
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