原生殖细胞和囊胚细胞为载体制备转基因家禽的初步研究

来源 :福建师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sunhaifeng112
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以麻鸭原生殖细胞和囊胚细胞为载体对转基因家禽的制备进行了初步研究。①鸭原生殖细胞的观察及体内转染:抽取了胚胎血液,进行PAS染色,结果发现发育至第14-20期的麻鸭和骡鸭胚胎血液中原生殖细胞的浓度很高,最高峰都出现在16期,分别为8.975%和2.187%;进而采用血管注射法,用In vivo GeneDelivery System和pEGFP-N对迁移于血管的原生殖细胞进行了转染,对存活的400枚胚胎进行冰冻切片检测发现,部分胚胎有Gfp表达信号,表达的组织包括肢芽、末脑、体节、脊索、脊髓、脏壁中胚层、内胚层、中肾、胃、胚外血管和心室壁等,其中3枚胚胎的性腺中有表达信号,比率为0.75%。②囊胚细胞为供体的嵌合体制作:分离了X期的麻鸭囊胚细胞,进行了体外培养,发现在培养基中添加2-3%的胚胎提取物能很好的促进囊胚细胞的体外生长和增殖;转染实验表明,血清的存在并不影响转染的效率,反而促使细胞更好的存活;转染后的细胞仍然保持较强的嵌合能力,在注入骡鸭胚胎之后能嵌合到胚胎的组织中,嵌合部位为下颌突、脑室壁、羊膜、卵黄静脉、心室、血管丛、血细胞、肢芽和性腺,对存活的24枚胚胎进行检测,发现全部胚胎都有体细胞嵌合,嵌合率为100%,其中2枚是性腺组织嵌合体,嵌合率为8.3%。
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