细胞色素P450甾醇14α脱甲基酶(CYP51)是真菌麦角甾醇合成中的关键酶,也是唑类杀菌剂作用靶标。大部分真菌中含有一个或两个CYP51基因,CYP514,和CYP51B,而在镰刀菌属真菌中还有第三类CYP51基因,称之为镰刀菌属特异性CYP51C基因。虽然已有研究表明,镰刀菌中三个同源CYP51基因功能不同,CYP51B基因是真菌中最保守的CYP51基因,编码最主要的甾醇14α-脱甲基酶;CYP514基因则在CYP51B基因缺失或被抑制时,或唑类药剂施用和逆境下大量诱导表达,用于互补CYP51B基因的功能;而CYP51C基因则不再作为甾醇14α-脱甲基酶,而与镰刀菌对寄主小麦致病性及DON毒素合成密切相关。但是目前,关于镰刀菌属中三个CYP51基因的亚细胞定位尚无报道。本研究通过限制性酶切、连接的方法,构建了 CYP51C基因的过量表达载体pYGTC和互补融合表达载体pYK11C,构建了 RFP融合表达载体质粒pKHR;并通过限制性酶切连接的方法和一步法试剂盒,构建了三个同源CYP51基因,CYP51A、CYP51B和CYP51C基因的GFP融合表达载体pKNTGA-1,pKNTGB和pKNTGC2-1。此外还进行PEG介导的原生质体遗传转化,以敲除转化子ΔFgCYP51和 ΔFgCYP514C,ΔFgCYP51BC为材料,为探究 CYP51C 基因功能和CYP51基因亚细胞定位研究提供材料。