基因重组大肠杆菌发酵生产苏氨酸条件优化

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仅就作为饲料来说,苏氨酸与赖氨酸、蛋氨酸和色氨酸齐名都是饲料中的限制性氨基酸,而且排名靠前,随着赖氨酸的推广和普遍添加,苏氨酸逐渐成了,关键限制性氨基酸。目前从国际市场来看,苏氨酸是需求量增长最快的氨基酸之一,但是我国的苏氨酸生产从生产企业数量到发酵菌株产酸率再到苏氨酸的提取率,都与国际先进国家存在很大差距。本论文则是以一株基因重组的大肠杆菌为出发菌株,对其进行种子培养条件和发酵培养条件的优化,和复壮之后使其摇瓶发酵的产酸率由原来的30.3g/L提高到41.2g/L,而10L发酵罐中的产酸率由原来的70g/L提高到81.3g/L。主要工作包括以下几个方面:种子培养条件的优化,是为了获取优良种子,缩短发酵周期,提高设备利用率的必需步骤。本论文根据选取菌种的实际特点,针对溶氧、碳源和pH的控制,从纱布层数、三角瓶的选择、葡萄糖的添加、缓冲体系的构建和谷胱甘肽的使用几个方面进行了尝试,并最终在原有配方的基础上,增添了缓冲体系,使得种龄提前了4小时,缩短了发酵周期。原始配方中,氮源只使用了硫酸铵这一无机氮源,本论文通过比较添加了玉米浆作为有机氮源,再经过对蔗糖、硫酸铵和玉米浆的正交实验之后,将苏氨酸的摇瓶产量提高了40%。基因工程菌与正常菌株或者诱变所得高产菌株相比,更容易退化,本课题中所选用的这株基因重组的大肠杆菌,便出现了生长缓慢,同等条件产酸下降的现象,于是,需要对其进行菌株的复壮。经过平板划线筛选,最终从15株分离出来的大肠杆菌中,筛选出产酸最高的一株,与原菌株相比,产酸率还有所提高。我国苏氨酸研究大多停留在实验阶段,本论文在得到摇床优化培养基配方之后,进行了10L发酵罐的发酵条件优化和补料控制的实验,从而实现了苏氨酸的扩大生产。
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