白皮松和美国黄松组织培养及快繁技术研究

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白皮松和美国黄松组织培养和微体快繁研究表明,在离体培养条件下,以白皮松成熟胚为材料,诱导出大量不定芽;以美国黄松成熟胚为外植体获得了再生小植株,生根率提高到15%。初步探索出白皮松、美国黄松微体快繁的有效途径。其主要结论如下:(1)胚是白皮松(Pinus bangeana)和美国黄松(Pinus ponderosa)微体快繁的最佳外植体;在组织培养前,切除胚根和其相连的部分—下胚轴,外植体的生长和不定芽的分化较好。(2)白皮松种子在55℃水中浸泡30min,然后用自来水浸泡3-5天;美国黄松种子用55℃水浸泡10min后,用自来水浸泡2-3天。选用0.2%的KMnO4溶液对白皮松种皮消毒30min,对美国黄松种皮消毒10min。对种皮消毒后,去掉种皮,经70%乙醇漂洗20s,0.1%HgCl2消毒8-10min,无菌水冲洗3-4次,于无菌条件下用解剖刀和镊子剥去胚乳,取出成熟胚接种到培养基上,污染率低。(3)白皮松不定芽的诱导以MS为最佳培养基,不定芽的诱导率达70%以上,继代培养基仍以MS为基本培养基,不定芽的增殖和生长状况良好。(4)美国黄松不定芽诱导以GD培养基诱导效果最佳;不定芽增殖选用1/2GD和1/2SH培养基,不定芽伸长选用GD和SH培养基;生根培养选用1/2GD和1/2SH,以1/2GD培养基为佳。(5)白皮松不定芽诱导采用6-BA 3.5mg· L-1和NAA0.4 mg· L-1及IBA0.1 mg· L-1配合,不定芽的诱导率达到70%以上。(6)美国黄松采用6-BA和NAA两种配合并进一步缩小激素浓度梯度,6-BA 0.5mg· L-1-1.0mg· L-1,NAA0mg· L-1-0.5mg· L-1时,不定芽的诱导率达到60%以上,在继代培养过程中添加GA3,不添加其他生长调节剂,促进了白皮松不定芽的伸长;采用NAA和GA3组合,使美国黄松嫩稍生根率从2%提高到15%。(7)在适当的培养基和激素配比条件下,适当提高蔗糖浓度,可作为促进白皮松子叶上不定芽发生的一个重要因素。(8)在初代培养基中添加活性炭不利于不定芽的诱导和分化;继代培养基中加入1%的活性炭,促进了不定芽的生长;在生根培养基中加入适量活性炭能促进根的生长。(9)美国黄松嫩稍在1/2GD和1/2SH培养基上均能生根,美国黄松的嫩稍在1/2GD培养基上,NAA1.0 mg· L-1,GA30.5 mg· L-1时的生根率最高,达到16.7%。在1/2SH培养基上,当NAA0.5 mg· L-1和GA30.5 mg· L-1时的生根率,与NAA1.0 mg· L-1不加GA3的生根率相当,达到8.3%。
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