【摘 要】
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汞是一种有毒重金属,在动物和人类的生活中广泛存在,如大气、水体和土壤等。我国是产汞大国,同时汞排放量也居全球首位,由此带来的严重汞污染不容忽视。尽管我国签署了《水俣公约》并严格遵循公约中相关规定,但已经存在在环境中的汞并不能快速清除。环境中的汞是长期存在并且无处不在的,畜禽通过摄入含汞的饮水或/和饲料导致汞蓄积。肾脏作为汞排泄的最主要器官,是汞毒性作用的主要靶点之一。由肾损伤导致的动物源性食品品质
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汞是一种有毒重金属,在动物和人类的生活中广泛存在,如大气、水体和土壤等。我国是产汞大国,同时汞排放量也居全球首位,由此带来的严重汞污染不容忽视。尽管我国签署了《水俣公约》并严格遵循公约中相关规定,但已经存在在环境中的汞并不能快速清除。环境中的汞是长期存在并且无处不在的,畜禽通过摄入含汞的饮水或/和饲料导致汞蓄积。肾脏作为汞排泄的最主要器官,是汞毒性作用的主要靶点之一。由肾损伤导致的动物源性食品品质和产量下降会导致严重的经济损失,而且畜禽的慢性汞中毒更严重威胁动物源性食品安全。因此,研究无机汞暴露诱导的肾损伤及其分子机制具有重要的现实意义和科学价值。试验分为体内试验(小鼠饮水汞试验)和体外试验(HEK-293T细胞试验)两部分。体内试验选取6-8周龄健康雄性昆明小鼠28只,随机分为4组(n=7)。每日的饮用水中添加不同浓度的HgCl2,分别为对照组(0 mg/L)、低剂量HgCl2组(20 mg/L)、中剂量HgCl2组(40 mg/L)和高剂量HgCl2组(80 mg/L),试验周期16周。试验周期结束后采集血液及肾组织。通过HE染色、生化指标检测、透射电镜、肾组织ATP浓度检测、氧化应激指标检测、彗星试验、原位末端标记法、q-PCR和western blot等技术进行检测。体外试验选取肾细胞系,分别为对照组(0μmol/L)、低剂量组(1.25μmol/L)、中剂量组(5μmol/L)和高剂量组(20μmol/L)。进行细胞活力检测、活性氧检测和q-PCR检测,进一步研究慢性无机汞暴露所致小鼠肾损伤的分子机制。试验结果:(1)H&E切片结果表明无机汞暴露诱导肾损伤。(2)生化指标结果表明无机汞暴露导致CREA和BUN升高。(3)透射电镜结果显示,无机汞暴露导致线粒体损伤。(4)肾组织ATP浓度结果表明,无机汞暴露诱导肾能量稳态破坏。(5)氧化应激指标结果表明,无机汞暴露导致肾氧化应激。(6)彗星试验结果表明,无机汞暴露诱导小鼠肾DNA损伤。(7)TUNEL试验结果表明,无机汞暴露诱导小鼠肾细胞凋亡。(8)q PCR及western blot显示,无机汞暴露抑制沉默信息调节因子(silent information regulator1-1,Sirt1)、过氧化物酶体增殖激活受体-γ共激活因子-1α(peroxisome proliferator-activated receptor-γcoactivator-1α,PGC-1α)和线粒体融合蛋白2的基因和蛋白表达,升高线粒体分裂蛋白1的基因和蛋白表达,结果表明无机汞暴露通过抑制Sirt1/PGC-1α信号通路诱导小鼠肾线粒体动力学紊乱;无机汞暴露抑制核因子红系相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、醌氧化还原酶1(NAD(P)H:quinone oxidoreductase l,NQO1)和血红素加氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)的基因和/或蛋白表达,结果表明无机汞暴露通过抑制Nrf2信号通路诱导小鼠肾氧化应激;无机汞暴露抑制B淋巴细胞基因2(B-cell lymphoma gene 2,Bcl-2)的蛋白表达,升高Bcl-2相关蛋白x蛋白表达,结果表明无机汞暴露诱导小鼠肾细胞凋亡。(9)体外试验结果表明,无机汞暴露诱导体外培养的肾细胞活力降低和ROS生成增多,q PCR及western blot结果验证了无机汞诱导肾线粒体动力学稳态失衡。综上所述,本研究的结果揭示HgCl2通过抑制Sirt1/PGC-1α和Nrf2信号通路诱导线粒体动力学障碍和氧化应激,最终导致肾细胞凋亡。Sirt1/PGC-1α信号通路可能是治疗无机汞暴露致肾损伤的潜在分子靶点。
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