目的:脑卒中（stroke）是一种急性的脑损伤疾病,主要表现为脑血管病变引起的脑组织损伤及相关神经功能损伤。目前美国食品药品监督管理局（FDA）仅批准组织纤溶酶原激活剂（tPA）用于脑缺血损伤的治疗。因tPA治疗的局限性,所以寻找新的治疗策略尤为重要和迫切。研究表明抑制磷酸二酯酶4（phosphodiesterase 4,PDE4）对脑缺血损伤有保护作用,而且可通过自噬对脑缺血损伤发挥调控作用,但具体机制尚未明确。基于PDE4、脑缺血损伤和自噬之间的密切关系,本研究旨在考察Roflupram（ROF）在脑缺血损伤中对自噬的调控作用及机制。方法:（1）进行小鼠海马神经元细胞（HT-22）和原代皮层神经元培养,利用无糖培养基和缺氧小室建立氧糖剥夺（oxygen and glucose deprivation,OGD）模型;采用乳酸脱氢酶检测试剂盒（LDH）和Cell Counting Kit-8（CCK-8）细胞活力测试盒检测ROF对OGD造模后细胞毒性和细胞活力的影响;通过免疫印迹法（Western blotting）检测ROF对OGD造模后细胞神经生长相关蛋白-43（GAP-43）和突触蛋白1（Synapsin-1）的影响;通过四甲基罗丹明乙酯（TMRE）试剂盒和MitoSOX试剂盒检测ROF对OGD造模后细胞线粒体功能的影响;通过转染PDE4B siRNA（siPDE4B）来进一步验证抑制PDE4对OGD诱导的HT-22细胞毒性的作用。（2）通过Western blotting检测ROF对OGD造模后神经元细胞中自噬相关蛋白如微管相关蛋白轻链3（LC3）、自噬底物蛋白sequestosome 1（p62）和Beclin-1蛋白表达水平的影响;通过溶酶体荧光探针（LYT）和CYTO自噬检测试剂盒检测ROF对OGD造模后神经元细胞中酸性囊泡和自噬囊泡的影响;通过Western blotting检测ROF对OGD造模后神经元细胞中蛋白激酶B（AKT）和雷帕霉素靶蛋白（mTOR）磷酸化水平的影响;给予自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）干预,通过LDH法和CYTO染色检测3-MA的作用;给予AKT抑制剂MK-2206和mTOR抑制剂雷帕霉素（Rapamycin,RAPA）干预,通过LDH法和Western blotting检测两者的作用。（3）采用线栓法在SD大鼠上构建大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）导致的局灶性脑缺血模型;大鼠缺血2 h后腹腔注射2 mg/kg ROF,再灌注24 h后进行神经功能评分;再灌注24 h后进行TTC染色,测定大鼠脑梗死面积测定;采用Western blotting检测ROF对MCAO造模后自噬相关蛋白和突触相关蛋白的影响。结果:（1）利用无糖培养基和缺氧小室建立OGD模型,给予ROF（20 μM）处理HT-22细胞和原代皮层神经元后,均降低细胞毒性和提高细胞活力。（2）Western blotting结果发现,ROF减少OGD诱导的HT-22细胞中突触相关蛋白GAP-43和Synapsin-1的丢失。（3）TMRE和MitoSOX染色结果显示,ROF逆转OGD诱导的HT-22细胞内线粒体膜电位水平的降低以及线粒体中超氧阴离子水平的升高。（4）敲低PDE4B逆转OGD诱导的HT-22细胞毒性的升高。（5）Western blotting、LYT和CYTO染色结果发现,ROF减少OGD造模后上调的细胞LC3Ⅱ和Beclin-1的表达水平、增加下调的细胞p62水平、增加AKT在Ser 473位点的磷酸化水平、增加mTOR在Ser 2448的磷酸化水平、减少细胞酸性囊泡和自噬囊泡,阳性对照药Rolipram能发挥一致的作用。（6）LDH、Western blotting和CYTO染色结果显示,自噬抑制剂3-MA可降低OGD造模后的细胞毒性,与ROF的作用一致;ROF联用3-MA可进一步降低自噬囊泡数量。（7）LDH 和 Western blotting 结果显示,AKT 抑制剂 MK-2206 和 mTOR 抑制剂RAPA均能阻断ROF的作用。（8）TTC染色和神经功能评分结果显示,ROF降低MCAO大鼠脑梗死面积和神经功能评分,改善MCAO大鼠的神经功能症状。（9）Western blotting结果显示,ROF降低MCAO大鼠局灶性脑缺血后皮层缺血半暗带区自噬相关蛋白LC3Ⅱ和Beclin-1的表达水平、升高GAP-43、Synapsin-1和突触后密度蛋白95（PSD95）的表达水平。结论:PDE4抑制剂ROF能减轻OGD诱导的神经元损伤,其机制可能是通过AKT/mTOR信号通路抑制神经元自噬以及改善突触功能。ROF能改善MCAO大鼠的神经功能症状,其机制可能与抑制自噬和上调突触相关蛋白进而改善突触功能有关。