【摘 要】
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目的:探讨AKT2在肾癌组织中的表达情况及其临床意义,体外实验中,应用小RNA干扰技术降低AKT2的表达对肾癌细胞迁移和侵袭能力的影响,明确AKT2在肾癌细胞转移中的作用。
方法:
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目的:探讨AKT2在肾癌组织中的表达情况及其临床意义,体外实验中,应用小RNA干扰技术降低AKT2的表达对肾癌细胞迁移和侵袭能力的影响,明确AKT2在肾癌细胞转移中的作用。
方法:⑴用免疫组化的试验方法检测AKT2在肾癌组织中的表达情况,统计分析AKT2表达与各临床病理参数之间的相关性,统计AKT2的临床意义。⑵利用小RNA干扰技术,应用合成的小RNA干扰质粒转染肾癌细胞ACHN,建立AKT2稳定降表达细胞系,用Western blotting技术检测转染效率。⑶用趋化运动实验和划痕实验检测AKT2降表达对肾癌细胞运动能力的影响。⑷体外侵袭实验检测AKT2降表达对肾癌细胞侵袭能力的影响。⑸用黏附实验检测AKT2降表达对肾癌细胞黏附能力的影响。采用磷酸化特异性抗体检测AKT2降表达对EGF刺激后integrinβ1磷酸化水平的影响。⑹采用磷酸化特异性抗体检测AKT2降表达对EGF刺激后肌动蛋白结合蛋白cofilin磷酸化水平的影响。⑺用Western Blotting方法检测AKT2降表达对PKCζ活化程度的影响,进一步明确AKT2在肾癌细胞趋化运动中作用的分子机制。
结果:①AKT2在不同类型肾癌组织表达阳性率不同,透明细胞癌阳性率40.6%(54/133),乳头状肾细胞癌的阳性率34.6%(28/81),嫌色细胞癌阳性率63.3%(31/49),差异有显著性(P<0.05)。②透明细胞癌、乳头状肾细胞癌AKT2高表达与肿瘤分级、分期、转移均相关(P<0.05),而嫌色细胞癌中AKT2高表达只与肿瘤分期有关,与转移、预后无关。Log-rank,Kaplan-Meier生存曲线分析透明细胞癌、乳头状肾细胞癌AKT2高表达均与预后不良相关(P<0.05)。③小RNA干扰技术转染肾癌细胞ACHN后,建立AKT2稳定降表达细胞系,Western Blotting检测AKT2蛋白水平表达明显下降。④AKT2降表达的ACHN细胞的趋化运动能力比对照组细胞明显减弱(P<0.05)。⑤AKT2降表达的ACHN细胞的侵袭能力比对照组细胞明显减弱(P<0.05)⑥AKT2降表达的ACHN细胞黏附能力比对照组细胞明显减弱(P<0.05),EGF刺激后integrinβ1磷酸化水平降低。⑦AKT2降表达能够降低ACHN细胞cofilin的磷酸化水平。⑧EGF刺激后降表达AKT2的表达减弱了PKCζ的活化程度。
结论:⑴AKT2在不同类型肾癌组织中表达不同;⑵透明细胞癌、乳头状肾细胞癌的AKT2高表达与肿瘤分级、分期、转移、预后均具有相关性,而嫌色细胞癌AKT2高表达只与肿瘤分期有关,与其它各临床病理参数并无显著相关性;⑶AKT2参与调控了EGF诱导的肾癌细胞的趋化运动和转移;⑷AKT2有可能成为治疗转移性肾癌新的靶点。
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