口腔癌主要通过淋巴道转移，虽然多年来各种诊疗技术有了很多进步，淋巴转移的准确诊断和预防治疗手段仍然有限，转移导致病人生存时间和生存质量的显著下降没有得到明显的改善；而在基础研究中，缺乏有关肿瘤淋巴转移的细胞和分子生物学机制探讨，对构成转移通道的淋巴管在肿瘤转移中的变化不甚清楚。本课题回顾本院口腔癌病例资料，总结其淋巴结转移规律及对预后影响，并研究淋巴管内皮细胞在受肿瘤细胞作用后，其增殖、代谢以及基因表达等的改变。一、口腔癌淋巴转移临床回顾 1．口腔癌颈部淋巴结处理的随访研究 随访301例首诊治疗的口腔鳞状细胞癌病例，统计总体转移淋巴结病理检出率为41.6％，原发于舌、口底、下龈、颊四部位的癌肿单纯切除原发灶后淋巴结复发率可达32.1％，功能性颈清扫（舌骨上颈清扫）后淋巴结复发率为14.7％；TNM分期对临床判断淋巴结转移是较为有效的依据；对前述四个部位鳞癌有必要扩大颈清扫的适应证范围以及手术清扫范围。 2．N₀、N₁期口腔癌术后淋巴结转移逐步判别分析 随访146例N₀、N₁期舌、口底、下龈、颊部鳞状细胞癌病例，单因素分析病人16个临床因素与术后发生颈淋巴结转移的关系表明颈清扫方式和术后放疗是显著影响因素（P＜0.05）；应用逐步判别分析法对各因素进行筛选计算，建立的判别函数经原始资料回代检验，判别准确度71.9％（105/146），灵敏度83.3％（15/18），特异度70.3％（90/128）。 3．口腔鳞癌淋巴转移的临床病理危险因素 回顾随访193例舌、口底、下龈、颊部鳞状细胞癌，用单因素分析和显著性检验，观察T、N分期、肿瘤部位、浸润方式、厚度、病理分化、 第叫车队人学博卜学位论义5 肿瘤细胞有丝分裂数、细胞角化及核分化程度、淋巴细胞浸润等对淋巴结 转移和术后转移的影响程度，结果表明T分期、N分期、肿瘤浸润方式和 厚度、淋巴细胞浸润显著影响病理确诊的淋巴结转移卑 多因素回归分析 发现只有肿瘤浸润方式是显著性因素，并显著影响术后转移，说明肿瘤浸 润方式是影响口腔鳞癌淋巴结转移的重要因素 4．淋巴转移等临床病理因素对舌癌病人生存期的影响 回顾随访86例本院治疗的舌鳞癌病例，对h M分期、吸烟饮酒、治 疗方法、病理分化、月中瘤浸润方式、浸润深度、瘤细胞分裂计数、淋巴细 胞浸润、淋巴结转移、复发等因素与舌癌相关5年生存率的关系进行单固 素分析，只有 T分期和吸烟饮酒未友现对生存率有显著影响仔＞0．05f COX 多因素分析则只有病理检出淋巴结转移和术后局部复发（P＜0．of）以及术 前化疗、病理分化瞩 ＜ 0刀5)显著影响生存率，表明淋巴结转移和局部夏发 是舌癌预后恶化的重要原因，平阳霉素化疗加手术的治疗方法则可改善预 后。 二、肿瘤对淋巴管生成作用的研究 1．VEGF｛在颊癌中表达及与淋巴结转移关系的研究 回顾叩例。腔颊粘膜鳞癌病侈帕训忘床病理资料．存档蜡块切片。原位 杂交和免疫组化方法研究 VEGF－C和 Fit－4（VEGFR－3）在肿瘤组织中的表 达、统计分析其与淋巴结转移或术后转移的关系，结果表明有淋巴转移或 术后发生转移的病例冲瘤VE0F－C 阳性表达章显著高于无3专移的病例、乒 多见H－4阳性的大大巴管存在于后十瘤瘤吐问忆 说明颊拜。秀导淋巴管生成。 扩张可能是其友生淋己转移的重要步簸 2．小鼠淋巳管瘤的诱导与组织学观察 BI卜。小支腹腔注射车氏不Z全佐利两次、司隔15d、吐死后可见在隔 厂LS引空面足杆佐表面旷｛过界；奏芝约多中。性的白色一瘤汪纽织．组织学凛W车厂人学博1－学位论义6观察表明此新生组织为多管腔囊性，由内皮细胞构成，用免疫纽织化学方法检测淋巴管内皮细胞标志性抗原 VEGFR、3和 CD3，肿物细胞均有阳性染色，观察6月肿瘤不再生长，表明止匕为良。娃淋巴管瘤。 3．体外三维淋巴管生成模型 将诱导的小鼠腹腔良冶淋巴管瘤分离、分切，纤维蛋白凝胶包埋体外培养，从倒置显微镜可看到大量微管状物从瘤组织长入凝月交，电镜观察和免疫组织化学染色表明微管由淋巴管内皮细胞构成，此方法成功构建了方便的淋巴管生成体外观察模型。 4．小鼠淋巴管内皮细胞儿EC)的体外培养 分离小鼠腹腔良性淋巴管瘤，分别用组织块法和二削匕法进行原代培养，可从此淋巴管瘤得到淋巴管内皮细胞，并且在扣％胎牛血清、肝素、牛脑垂体提取物支持下，可于明胶涂层表面贴壁生长达到铺满的单细胞层，在倒置显微镜下观察具有内皮细胞典型的鹅卵石样外观，Fit－4 k色为阳性。 5．H22移植颊癌转?