镰刀菌的SRAP分子标记及其遗传多样性分析

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镰刀菌是一类常见的真菌,分布广泛,种类繁多。本试验从采自不同地区疑似镰刀菌罹病植株体内,分离纯化出121株镰刀菌(Fusarium),用SDS-CTAB方法提取基因组DNA,应用SRAP-PCR分子标记技术,对其进行遗传多样性的分析,试验结果如下:1.利用SDS-CTAB法提取的基因组DNA比较完整,且质量较高。2.参考Li和Quiros等推荐的引物,选出上下游引物各5条,组成25对引物组合,在SRAP-PCR扩增体系中采用复性变温法,筛选出能扩增条带清晰、亮度较好、多态性明显且稳定的12对引物。运用所选的12对引物组合,对所有供试菌株进行扩增,大部分能得到100bp-1500bp的DNA片段,共扩增出260条多态性条带。其中每对引物组合均可扩增出17-30条多态性条带,平均每对引物可扩增出21.6条带。3.对121株镰刀菌的SRAP-PCR的结果进行聚类分析,在遗传相似系数为0.814时,可将121株镰刀菌分为6个类群,在不同的遗传相似系数水平下,6个类群又可以分为12个亚类。通过SRAP-PCR分子标记技术扩增出的条带图谱,反映出的镰刀菌遗传多样性在一定程度上与形态学分类相吻合。4.不同组、种镰刀菌的遗传相似性分析结果表明,不同组、种镰刀菌的遗传分化较大,遗传变异比较丰富;种内不同镰刀菌菌株之间也存在较为明显的遗传分化。5.通过对不同寄主不同地理来源的同种镰刀菌,相同寄主不同地理来源的同种镰刀菌,不同寄主相同地理来源的同种镰刀菌,同种寄主和地理来源的同种的镰刀菌进行多样性分析。结果表明,镰刀菌种内各菌株的遗传相似性与地理来源和寄主无相关性。6.采用SRAP分子标记技术,选取1对多态性较好的引物,构建121株镰刀菌的指纹图谱,可以直观地将尖孢镰刀菌与其它镰刀菌种区分开,且每个菌株都有独一无二的指纹,这说明利用SRAP分子标记技术建立的指纹图谱用于镰刀菌种的分类鉴定具有一定的可行性。
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