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全球已经报道的葡萄属植物有70余种,分属于真葡萄亚属和圆叶葡萄亚属。世界野生葡萄被划分为欧亚、北美及东亚三个分布中心。我国处于东亚分布中心,约占世界野葡萄资源的60%。野生葡萄具有许多优异的农艺性状,是栽培葡萄品种改良的重要资源库。云南有野生葡萄属植物12种,对这些野生葡萄资源的研究和有效利用对培育云南特有栽培葡萄品种以及开发特色酿酒葡萄新资源具有重要意义。
本研究对云南昆明地区的野生葡萄资源进行了初步的调查,对西山蘡薁野生葡萄(V.thunbergii.sied)资源的分布特征以及遗传多样性进行了分析,同时对云南几种野生葡萄资源的种质保存方式进行了探索。结果表明:
1、对昆明及周围几个县区(包括晋宁、嵩明、富民等)的野生葡萄属资源进行调查发现,昆明地区分布的野生葡萄资源主要是蘡薁葡萄,未发现《云南植物志》中记载的桦叶葡萄(VitisBetutifoliaDielsetGilg)和毛葡萄(V.quinqanguoariiRehd)。
2、昆明西山蘡薁葡萄主要分布于海拔2100m-2400m的范围内,分布呈聚集分布中的核心分布模式,各群体间或群体内的年龄结构差异较大。花期3-5月,果期6-10月,果期较长,但结实率较低,果实成熟期并不一致,成熟果实呈紫红色,其形状为球形或椭球形。叶形具有典型的多形性,有的叶裂很深呈掌形,有的几乎无叶裂呈心形。
3、利用RAPD和SSR分子标记技术对来源于西山的5个群体蘡薁葡萄的遗传多样性进行了分析。采用5个多态性较好的RAPD引物进行扩增,共产生71个位点,其中多态位点68个。在物种水平上,蘡薁葡萄多态位点百分率PPB为95.77%,Nei’s基因多样性指数H为0.3442,Shannon’s多样性信息指数Hsp为0.5100;在群体水平上,各个群体的多态位点百分率PPB差异较大(35.21%~84.51%),平均值为60.85%,Nei’s基因多样性指数H平均为0.2234,各个群体的Shannon’s多样性信息指数Ho平均为0.3305。各群体间的Nei’s遗传一致度(Ⅰ)范围为0.7171~0.9489。基于Nei’s遗传多样性分析得出的群体间遗传分化系数Gst=0.3269。Mantel检测发现,群体间的遗传距离和地理距离之间呈显著的正相关(r=0.981,P=0.019<0.05)。
4、利用3对SSR引物共检测出33个位点,其中多态位点25个。在物种水平上,多态位点百分比PPB为75.76%;5个群体总的等位基因数(Na)为1.7576;有效等位基因数(Ne)为1.3953;Shannon’s多样性指数(Hsp)为0.3679;Nei’s基因多样性指数(H)为0.2409。SSR和RAPD标记的分子聚类获得了不完全相同但总体趋势一致的聚类树状图。将西山地区蘡薁野葡萄与晋城野生葡萄聚类,而人工栽培品种单独处于另一分枝。
5、分别采用原位保存、构建资源圃、扦插和组织培养的方法进行种质资源保存的实验。前两种均取得了较好的效果,使用0.1%IAA浸泡枝条然后再扦插的方法,可以使扦插的成活率达到90%以上。经过实验,1/2MS+0.5ml/L6-BA+0.1ml/LNAA的组织培养配方有利于葡萄无菌苗的生长和保存。
6、通过对多种野生葡萄叶绿体TrnL-TrnF基因的分析,所得到的基因序列用CLASTALx1.83软件作出系统进化树,可以看到多个品种的野生葡萄之间的亲缘关系,而它们与其地理分布之间并无明显关联。