鱼皮胶原的分离与纯化

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胶原是动物体内结缔组织的重要结构蛋白质,广泛分布在所有多细胞动物的皮肤、骨骼、软骨、牙齿、肌腱、韧带、血管等中。它富含甘氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸,己广泛用于医药、食品、保健、化妆品等众多领域。由于受疯牛病的影响,陆生哺乳动物胶原制品的安全性开始受到人们的质疑。因此,为了开发新型胶原资源,同时提高淡水鱼加工废弃物的综合利用。本文以淡水鱼草鱼为研究对象,对鱼皮胶原进行提取和纯化研究。建立了测定原料中羟脯氨酸(Hyp)含量的碱水解法,并与酸水解法作了对比。考察了NaOH的浓度、水解时间和碱液与样品质量比三种因素对测定结果的影响。通过正交实验,确定了碱水解法的检测条件。与酸解法相比,碱解法缩短了测定时间,重复性和一致性较好,回收率较高,可以代替酸解法测定原料中的Hyp含量。采用酸提取法对鱼皮胶原的提取与纯化。鱼皮经5%NaCl溶液(1:10,w/v),温度4℃左右,24h磁力搅拌处理,除去可溶性杂蛋白。通过盐析实验确定最适盐析浓度,胶原粗提液经盐析、透析,得到纯度约为93.00%的胶原溶液。结果表明,淡水鱼鱼皮胶原酸溶性好,酸法对其提取率高,约为82.15%。采用SDS-PAGE电泳对胶原制品的组成进行鉴定,同时对其特性粘度、热稳定性等特性进行研究。结果表明,实验所提取出的是未变性的胶原,类型为I型胶原,胶原的分子构型为[αl(I)]2α2(I),特性粘度为14.3dl/g,变性温度为28.8℃。
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