灰树花子实体次生代谢产物的分离纯化及生物活性研究

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灰树花[Grifola frondosa(Dicks, ex Fr)S.F.Gray]是一种药食兼用的蕈菌。本文对其子实体的乙醇提取物依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,再利用柱层析方法对各萃取物进行分离纯化,利用体外细胞模型和以Gly-Pro-AMC作为底物的荧光检测法对灰树花子实体的抗肿瘤活性和DPPⅣ酶抑制活性进行研究。  本论文首次从灰树花子实体中分离得到12个化合物并通过核磁共振、质谱等方法确定其结构,分别为麦角甾醇(1)、脑苷脂B(2)、1-十七醇(3)、正二十八烷(4)、烟酸(5)、尿嘧啶(6)、葡萄糖(7)、甘露醇(8)、琥珀酸(9)、烟酰胺(10)、腺苷(11)、尿苷(12)。  采用以Gly-Pro-AMC作为底物的荧光检测法测定灰树花子实体的各萃取物和纯化获得的化合物对DPP-Ⅳ酶的抑制作用,发现灰树花子实体醇提物的氯仿、乙酸乙酯、正丁醇三个萃取物对DPPⅣ酶表现出较强的抑制作用,在浓度为0.4 mg/mL时抑制率均超过了阳性对照,其中氯仿萃取物的IC50值为497.33μg/mL,表现出最强的抑制活性,石油醚和剩余的水溶萃取物表现出较弱的抑制活性。从氯仿萃取物分离得到的烟酸在1.0 mg/mL时对DPPⅣ酶的抑制率为47.92%,是所有化合物最高的,除葡萄糖和琥珀酸外的其余化合物对DPPⅣ酶均有不同程度的抑制作用,但活性相对较低。  利用体外细胞模型对灰树花子实体的抗肿瘤作用进行研究,发现灰树花子实体醇提物的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇四个萃取物对肿瘤细胞K562和SW620的增殖均有不同程度的抑制作用,对正常细胞WPMY-1的增殖无抑制。萃取剩余水溶萃取物对两种肿瘤细胞和正常细胞均有增殖抑制作用,说明其可能具有细胞毒性。纯化获得的化合物中麦角甾醇对K562细胞增殖抑制的IC50值达到15.29μg/mL,表现出最好的抗肿瘤活性。
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