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目的:恶性黑色素瘤(Malignant melanoma,MM)是一种高度恶性的肿瘤,多发生于皮肤,占皮肤恶性肿瘤的第三位(占6.8%~20%)。近年来,在全世界范围内,恶性黑色素瘤的发病率及死亡率都呈现持续增长的趋势,其恶性程度高,发生转移早,对放疗及化疗均不敏感,严重威胁人们的生命与健康。目前,恶性黑色素瘤的发生涉及种族与遗传、创伤与刺激、病毒感染、日光、免疫等多种因素。国内普遍对恶性黑色素瘤认识不足,重视程度不够,过度的紫外线照射、晒伤及长期局部刺激、外伤等均可导致良性色素痣产生恶变,诱发恶性黑色素瘤。研究表明,早期诊断及恰当的外科切除,可以使早期黑色素瘤治愈率超过90%,而晚期患者的5年生存率则仅为10%~50%不等。因此,早期诊断技术与方法的提高,有效的分子生物学靶点及基因的查找,对恶性黑色素瘤患者的预后具有十分重要的意义。目前发现自噬相关基因WIPI1在结肠癌等肿瘤中可以调控细胞生物学行为,本研究通过RNA干扰技术沉默WIPI1基因,检测其对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖及凋亡的影响,以期发现其与恶性黑色素瘤的关联及作用机制,为恶性黑色素瘤的基因治疗提供理论依据。方法:1.使用q PCR方法检测WIPI1基因在三株人黑色素瘤细胞A375、MUM-2B、MUM-2C中的表达;以WIPI1基因为模板,设计完成相应的干扰靶点,构建WIPI1基因的RNA干扰慢病毒载体;在工具细胞293T中,使用Western Blot法验证干扰靶点有效性。2.本实验分sh WIPI1组(正常A375细胞、加WIPI1基因sh RNA病毒感染的细胞组)与sh Ctrl组(正常A375细胞、加阴性对照病毒感染的细胞组),使用q PCR方法检测两组A375细胞中WIPI1基因m RNA表达量;应用Celigo法检测WIPI1基因敲减对细胞增殖能力的影响;Caspase3/7检测WIPI1基因敲减对细胞凋亡的影响;Annexin V-APC法检测WIPI1基因敲减对细胞凋亡的影响;PI-FACS检测WIPI1基因敲减对细胞周期的影响。结果:1.q PCR结果证实WIPI1基因在三株人黑色素瘤细胞中均为高表达;2.沉默WIPI1基因后,WIPI1基因m RNA表达受到明显抑制(P<0.05),敲减效率达到88.5%;3.沉默WIPI1基因后,A375细胞增殖抑制明显;4.相比sh Ctrl组,sh WIPI1组细胞凋亡数增多(P<0.05);5.沉默WIPI1基因后,sh WIPI1组细胞凋亡率增高(P<0.05);6.PI-FACS细胞周期检测:sh WIPI1组处于G1期的细胞增多(P<0.05),处于S期的细胞减少(P<0.05),处于G2/M期的细胞减少(P<0.05)。结论:1.沉默WIPI1基因可有效降低人恶性黑色素瘤A375细胞活性,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。2.WIPI1基因可能是恶性黑色素瘤的潜在靶点,为恶性黑色素瘤的早期诊断及针对晚期恶性黑色素瘤患者的分子靶向治疗提供帮助。