不同采收期黄芩药材指纹图谱的研究

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在目前的中药研究中,有共识的是中药药效是多种化学组分,在多个靶位共同作用的结果。但是中药材的品种之间的差异﹑不同的产地﹑不同的采收期的药材,其化学组分之间或者化学组分之间含量比例也会存有差异,这样就可以解释为什么中药要使用道地药材,因为道地药材经过了多年的临床实践,已经被公认为药效好,其质量是其他产地药材不可替代的。但在目前的中药质量标准研究中,还没有中药材的质量标准可以区分道地药材与非道地药材的质量差异。本文从赤峰与山东两个产地的不同采收期种植黄芩入手,采用高效液相色谱法(HPLC)和高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)对其进行了分析和探讨。黄芩属是唇形科中比较大的属,全世界约300种,我国约有100种。黄芩中含有多类化学成分,如黄酮类、二萜类、多糖类等,但黄酮类成分是黄芩中含有的主要成分,也是有效成分。目前国内外学者对黄芩的药理与临床研究大多都集中在黄芩的黄酮类成分。本文就是针对黄芩中黄酮类成分建立起来的指纹图谱进行研究,为将来黄芩道地药材的标准指纹图谱谱库的建立提供依据,为黄芩药效学的研究提供理论基础。黄芩存在道地药材与非道地药材之分,道地药材黄芩是生长在一定地域纬度﹑海拔﹑气候﹑土壤﹑生长环境﹑固定采收期等条件下。而不同采收期的黄芩是否存在化学组分差异和化学组分之间不同含量比例与其药效关系的研究,目前国内外较少。本文对不同采收期黄芩化学组分含量比例的关系做了初步研究分析,为确定黄芩固定采收期提供了理论基础,为区分道地黄芩与非道地黄芩﹑建立全面的质量标准﹑为将来揭示临床用药标准与疗效之间的关系打下基础,为道地中药材质量标准化提供理论依据。目的:1﹑建立黄芩药材的指纹图谱,优化提取方法与色谱条件,为黄芩药材深入研究打下基础。2﹑探讨利用液相色谱-质谱联用技术鉴定黄芩药材质量的方法,分析黄芩中黄酮类成分信息。3﹑以黄芩中黄酮类成分含量比例为指标,考察不同取样部位黄芩中黄酮类成分的动态变化,为考察不同采收期黄芩中黄酮类成分的动态变化打下基础。4﹑以黄芩中19种黄酮类成分含量比例为指标,考察不同采收期和不同产地黄芩中黄酮类成分的动态变化,以确定药材的最佳采收期,找出最优质黄芩。方法:1﹑采用TC-C18柱(4.6mm×250mm,5μm,Agilent),流动相:乙腈与0.1%冰醋酸溶液进行梯度洗脱,检测波长276nm,体积流量1.0ml·min-1,柱温25℃。2﹑选用XDB-C18(2.1mm×150mm,3.5μm,Eclipse)柱,以乙腈与1%冰醋酸溶液进行梯度洗脱,检测波长276nm,体积流量0.2mL·min-1,柱温25℃,在电喷雾串联质谱正负离子扫描方式下,对色谱图中19个色谱峰进行一级和二级质谱数据采集。3﹑采用面积归一化法,对不同产地﹑不同取样部位﹑不同采收期的黄芩中黄酮类成分含量比例的动态变化进行评价分析。结果:1﹑在黄芩药材的指纹图谱中,50min分离出30个色谱峰。2﹑确定黄芩中19个化学成分和他们的化学结构式。3﹑发现黄芩中不同的取样部分,黄芩中黄酮类成分含量比例也不相同,黄芩从细到粗苷类成分所占比例越来越少,苷元类成分越来越多,不同产地﹑不同采收期变化的程度也不相同。4﹑不同采收期黄芩黄酮类成分含量比例各不相同,不同采收期﹑不同产地的黄芩都有其特有的黄酮类成分含量比例。结论:1﹑分离出较多的色谱峰,可为黄芩药材的指纹图谱评价及物质基础的确定提供依据。2﹑HPLC-MS法使黄芩药材的质量标准更加完善,质量鉴定更加准确,为确定优质黄芩打下基础。3﹑对不同产地﹑不同取样部位﹑不同采收期的黄芩中黄酮类成分含量比例的研究,为确定黄芩最佳采收期,为全面控制黄芩药材的质量提供可靠的科学依据,为区分黄芩道地性与非道地性打下了基础。
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